第4节 高效液相色谱仪.ppt

第八章高效液相色谱分析法 一、高效液相色谱仪 HPLC 二、流程及主要部件 general process and main assembly of HPLC 一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4）Agilent 1100 二、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 2.Principle parts b. gradient elution (2) Sample injection system (3) Column (5) detector b. Diode-array UV detector(光电二极管阵列检测器) c. differential refractive index detector(示差折光检测器) d. 荧光检测器（fluorescence detector） 思考： 什么是梯度洗脱？它适用于哪些样品的分析？它与程序升温有什么不同？ * * 第四节高效液相色谱仪 high performance liquid chromatograph instrument of HPLC 1.Process Mobile-phase supply system a. Pump 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 （动画） Reciprocating pump Solvent polarity (composition) continuously varied or stepped 内梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 外梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： straight lengths of stainless steel tubing，usually the internal diameter is 1～6 mm, 5～40 cm long。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 a. UV detectors widely used，is sensitive to a large number of organic compounds。 特点： high sensitivity, about 10-8g/ml； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； not temperature or V of mobile-phase sensitive； wavelengths can be selected， simple to handle； can be used with gradient elution。 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 除紫外检测器之外应用最多的检测器； It measures changes in refractive index of the eluent that result from the presence of solutes as they emerge from the column。差值与浓度呈正比； universal detector: low sensitivity、is very sensitive to temperature changes、cannot be effectively with gradient elution 偏转式、反射式和干涉型三种； can give improved selectivity over UV detectors Sensitivities at least as good as and perhaps better than the UV detector are achieved. 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、