SOP-高效液相色谱仪操作标准.doc

高效液相色谱仪标准操作规程 一、目 的：制定高效液相色谱仪标准操作规程，以规范其操作。 二、范 围：中心化验室使用的高效液相色谱仪。 三、责任人：QC主管、QC人员对实施本SOP负责。 四、内 容 1.1高效液相色谱法是将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂，缓冲液为流动相，用高压泵将流动相压入装有填充剂的色谱柱，注入供试品，经流动相带入柱内，在填充剂上分离后，各组份先后进入检测器，进行数据处理，得到测定结果。 1.2除另有规定外，都应按现行版《中国药典》附录“高效液相色谱”的要求测定。 2.组成 ：HP1200高效液相色谱仪主要由四元泵、标准型自动进样器、柱温箱、 VWD检测器等组成。（详见图一） 详见图一 1 流动相A B C D 2 真空脱气装置 3、6、9、11 电缆 4 输液泵 5 自动进样器（无） 7 柱温箱 8 检测器（DAD） 10 数据接收处理控制系统（计算机） 12 打印机 3. 操作步骤 3.1准备工作：将配制好的对照品溶液、样品溶液放入进样器中；将流动相试剂放置在真空脱气装置。 3.2开机 3.2.1打开计算机，进入WindowsXP画面。 3.2.2打开各部分电源，脱气装置、输液泵、柱温控制、检测器的指示灯变黄。 3.3工作站操作 3.3.1打开工作站：在电脑桌面上，双击“仪器1联机”图标，或点击屏幕左下角的“开始”，选择“程序”，选择“Agilent Chemstation”,选择“仪器1联机”，化学工作站自动与LC通讯，进入的工作站画面。此时，各单元指示灯变绿，在工具条的View中选择界面为Runcontrol。 3.3.2调用方法：在第一个小窗口中利用下拉菜单，选择显示界面为Method and Run Control（方法和运行控制）； 在第二个小窗口中选择已设定的使用方法（若是旧用户则有记录），新用户先编辑实验方法，然后选工具栏中Method－Save Method As。 3.3.3溶剂的设置：在输液泵图标上按鼠标左键，在出现的小菜单中选Setup Pump，在Solvents栏中输入A、B、C、D溶剂名称；点溶剂瓶图标，在Solvent Bottles Filling中输入A、B、C、D各溶剂的实际体积数。点OK确定并退出。 3.3.4设置泵的参数：点输液泵图标，选Setup Pump，出现流速控制界面。设定流速flow rate（一般ODS柱为1ml/min）；设定A、B、C、D各溶剂比例，其中B、C、D可设置。OK。点输液泵图标，选pump control，点ON打开泵，OK，泵即开始工作，图标亦变为绿色。泵压一般不要超过150bar。若要设置各种淋洗变换程序如梯度洗脱，点输液泵图标，在此界面下面的空栏中，用Append添加一栏，依次输入时间、浓度、流速。可用Cut删去某一行或多行。设定好后，点OK退出本界面。其压力及时间程序过程在图标上的指示框里显示。 3.3.5设定柱温：在柱子图标上按鼠标左键，选Setup Column Thermostat设置柱温，可在室温以下10度至80度稳定控制，精度达到0.1度。设定后点OK退出，再点此图标，选Control打开恒温器。但若设定温度后直接点OK，则出现一英文对话框，询问是否打开温控，按yes钮即可。一般温度设置在30－50度之间。若不需控温，则在Setup Column Thermostat窗口中选not control。 3.3.6检测器参数设定 注意：为了延长氘灯和钨灯的使用寿命，在开始分析前进行预平衡时（每次分析前最好用待用流动相平衡20个柱体积以上）或所有分析完成后淋洗色谱柱时，不需打开检测器，仅在分析样品前10分钟左右打开即可。因此，在检测器的control窗口中，一定不要选At power on ,turnUV/VIS tamp on。在检测器图标中按鼠标左键，选Setup DAD Signals，出现检测器参数设定窗口，在此设定存储及检测信号： 每一谱图可选5个通道（A、B、C、D、E）检测。若需某个波长的信号，则在任一通道的小方框中打上X，然后设定检测波长及参比波长。其它参数如波长范围、时间、灯开关等，基本都不用变化，若需变化请与工作人员联系。完成后点OK退出。 peak width），最小面积（area reject），最小高度（height reject）等，可以象在word的表格里一样，插入、删除一行，选择不同时间开始不同值等，完成后按Out图标并选择存盘。 3.3.8进行定量分析时，选Calibration项设置. 3.3.9报告格式窗口（