8011戴安U3000高效液相色谱仪标准操作规程03.doc

****制药有限公司 第 PAGE 23 页 共 NUMPAGES 23 页 戴安U3000高效液相色谱仪标准操作规程 文件编码 戴安U3000高效液相色谱仪 标准操作规程 颁发部门 SOP-ZL-8011-03 GMP办公室 复印：1份 修 订 者 审 核 者 质量部审核 修订日期 审核日期 审核日期 批 准 者 分发部门 质量部 生效日期 批准日期 目 的：建立戴安U3000高效液相色谱仪标准操作规程，确保仪器使用的规范化、标准化。 范 围：适用于戴安U3000高效液相色谱仪的操作。 责 任：QC主管、仪器操作员对本规程的实施负责。 内 容： 内容： 1、流动相的配制 1.1首先配制常用流动相以及泵后密封圈清洗液小瓶（5%-10%甲醇溶液)如下图（图1）。配制过程中有机相必须用有机系0.45 μm的滤膜过滤，水相或缓冲盐用水系0.45μm的滤膜过滤。然后超声20分钟，超声时应避免超声温度过高以使有机相挥发。一般流动相可以保存3天，含缓冲盐的流动相必须临用新配，注意水相、5%甲醇或10%甲醇溶液（清洗液）必须每天更换！ （图1） 1.2 D通道抽滤并超声的10%甲醇；注意各通道必须保证流动相充足，当流动相体积150ml及以下，必须重新配制流动相， 2、开机、仪器方法设置。 2.1稳压电源 打开JJW-3KVA稳压器“ON”位置，等2-3分钟稳定后，按下ON-LINE 1KVA蓄电池电源前面板的“ON”，等2-3分钟。 2.2 打开泵(Pump)、自动进样器(Sampler)及所需检测器后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。各部分自检成功后，方可进行以下各部操作。 2.3 打开电脑，等5-7分钟，电脑稳定。 2.4打开软件，连接仪器。打开变色龙软件控制面板 双击电脑桌面的“变色龙Chromeleon 7”图标。出现如下对话框 点击“确定”后出现进样器界面（图2）： （图2） 输入自己的用户名及密码，进入软件界面如下图（图3） （图3） 在图3左侧出现两台仪器，一台为—U3000，一台为—U3000-01，根据需要选择操作的仪器。 在主页项中连接“泵”，“Sampler(自动进样器)”，及所需检测器，UV是紫外检测器，FLD是荧光检测器，A2D是蒸发光和示差折光检测器（图4）。 （图4） 然后点击“泵(Pump)”选项，再点击 下方的“更多选项”（图5-6）， （图5） （图6） 将“通过进样器”后“Yes”改为“NO”。关闭泵-更多选项界面，当电脑关闭或泵断开连接时，需执行此步骤。（图5-6） 2.5冲洗泵 单击（图5）对话框的“继续”按钮，等一分钟左右出现连接按钮变绿，首先将B通道流动相调节100%，单击“冲洗”按钮，出现如下对话框（图6）： （图7） 逆时针将单泵上方的金黄色螺母“排气阀”拧3圈左右，点击“忽略警告执行”按钮。依次按照B C D A顺序进行冲洗，结束后顺时针轻轻拧紧螺母，注意冲洗过程中流速必须为零。注意冲洗通道的比例必须是100%，当其他通道为比例0%时，A通道为100%。 2.6流速的调节 一般选用90%甲醇或90%乙腈冲洗色谱柱，调节流速时需等如0.2ml/min的步进速度（每个平衡点保持0.5分钟以上时）进行流速的升降，当达到0.6ml/min时，在此流速平衡20-30min后，进行等度流动相比列或梯度流动相初始平衡比例调整；在此流动相平衡20-30分钟后，调整到方法要求的流动相，并等待压力稳定后方可进行样品分析。 ① 当比例调整幅度大于40%的变化时，应进行过渡（选择两步或两步以上调整后达到所需要比例），通常先调节待加入流动相比例为5%-10%，平衡约5分钟以上，再调节比例到要求的浓度； ② 梯度泵开机时通常选择有机相调节平衡流速，再逐步加入水相； ③含盐流动相系统应以调节有机相比例5-10%平衡约30分钟以上，再逐步转换到盐通道。 注意当达到0.5ml/min及以上才能打开柱温箱、连接自动进样器以及紫外灯等。 2.7柱温箱的设置 根据实验要求，设置合理的温度，选择合适的色谱柱，试验没有要求时，默认柱温箱温度为30.0 0C, 注意柱温箱在待机状态时，流速最低为0.5ml/min,色谱柱不能用100%的纯水冲，最低为5%的甲醇或乙腈。 2.8 自动进样器的使用 2.8.1 进样针的清洗 单击“进样器(Sampler)”出现如下界面（图8）： 在启动项下点击“灌注注射器”，执行清洗，当模块状态项下绿色的“Ready”方可进行下一步，依次按照“灌注注射器 清洗缓冲环 外部洗针 洗缓冲环”顺序清洗3遍。 （图8） 2.8.2 放置样品瓶 将