第二十章高效液相色谱(第五版).ppt

第一节 概述 B = 2?Dm Dm ? T/? ?液 ?? ?气 THPLC为室温 TGC ? Dm Dg u u最佳 (3~5倍） ? B/u 可忽略不计 A与Cu对柱效的影响： 1. 涡流扩散相： A = 2? dp A减小的措施： 降低dp： 3~5?m 降低? ： 球形、仄粒度分布固定相 高压、匀浆装柱 2. 传质阻抗系数：C C = Cm + Csm + Cs Cs：化学键合相，单分子层。 ? C = Cm + Csm HPLC：H = A + Cm u + Csm u Cm ? dp2/ Dm Csm ? dp2/ Dm C 减小的措施： 降低dp 增大Dm ： 低粘度流动相 增加柱温 HPLC的适宜条件： 固定相与装柱：小粒度、仄分布球形固定相； 匀浆法装柱。 流动相：低粘度、低流量。（甲醇,1ml/min) 柱温：25?C （二）分离类型选择 第三节 高效液相色谱仪 流程 * 第二十章 高效液相色谱法 high performance liquid chromatography HPLC：采用特殊规格的固定相，流动相高压输送的液相色谱法。 HPLC的特点： 高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 化学键合相色谱法 bonded phase chromatography 化学键合相：将固定液的官能团键合在载体表面。 化学键合相色谱法：以化学键合相为固定相的色谱法。 第一节 高效液相色谱法的主要类型和原理 (一) 反相键合相色谱法 固定相：十八烷基键合相（C18或ODS） 流动相：甲醇-水或乙腈-水 1. 分离机制：复杂 2. 组分的出峰顺序： 极性大的先出峰，极性小的后出峰。 3. 流动相的极性与容量因子的关系： 流动相的极性增大，洗脱能力降低，溶质的k 增大，tR增大。 4. 应用： 非极性及中等极性的分子型物质。 例：固定相：C18 流动相：甲醇:水 ( 20:80) 某组分的tR=15min , 如何 使tR减小？ (二) 正相键合色谱法 固定相：氰基化学键合相：与硅胶相似 氨基化学键合相：分析糖类 流动相：非极性或弱极性溶剂。 正己烷，氯仿等。 1. 分离机制： 范德华力、诱导作用力或氢键作用力。 2. 组分的出峰顺序： 极性小的先出峰，极性大的后出峰。 3. 流动相的极性与容量因子的关系： 流动相的极性增大，洗脱能力增大， 溶质的k 减小，tR减小。 (三) 反相离子对色谱法 paired ion chromatography, PIC ion pair chromatography, IPC 定义：离子对试剂加入极性流动相中，样品离子与反离子生成中性离子对，使样品的K增加，改善分离效果。 1. 离子对试剂： 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 2. 分离机制： 影响容量因子的因素： 流动相极性：流动相极性增大，组分的k增大，tR增大。 PIC试剂的碳链长度：碳链长度增加，组分的K增大，tR增大。 流动相的pH: 3. 优缺点与用途： 优点： 易实现：ODS柱，甲醇-水，离子对试剂。 可避免缓冲液对流路的腐蚀（IEC）