高效液相色谱法测定乳酸菌中的_氨基丁酸.pdf

324 2008, Vol. 29, No. 06 食品科学 ※分析检测 高效液相色谱法测定乳酸菌中的γ-氨基丁酸 葛菁萍，蔡柏岩，宋明明，凌宏志，宋 刚，平文祥* (微生物黑龙江省高校重点实验室，黑龙江大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150080) 摘 要：建立了邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法。定量测定短乳杆菌中γ-氨基丁酸的方法，为进一步研究乳 酸菌中的γ-氨基丁酸奠定了方法基础。在对浓缩发酵上清液柱前衍生后，利用Nova2pakC18色谱柱，以50mmol/L 的乙酸钠(pH6.8)-甲醇-四氢呋喃(A相，82:17:1；B相，22:77:1，V/V)为流动相进行梯度洗脱，可以检测到痕量 γ-氨基丁酸(2.2mg/100g)。精确度和回收率实验表明，该方法可以用于痕量γ-氨基丁酸的检测。 关键词：高效液相色谱法；邻苯二甲醛；γ-氨基丁酸；乳酸菌 Determination ofγ-Amino Butyric Acid inLactobacillusbrevis GE Jing-ping，CAI Bai-yan，SONG Ming-ming，LING Hong-zhi，SONG Gang，PING Wen-xiang* Abstract： the content ofγ-amino butyric acid (GABA) inLactobacillus brevis fermentation supernatant, separation of GABA was carried out on Nova2pakC18 mol/L Key words：HPLC；o-phthaldialdelhyde；GABA；lactid acid bacteria 中图分类号：O657.72；TQ922.9 文献标识码：A 文章编号： γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid，简称GABA， 低，故常采用衍生后再测定的方法。 也称氨酪酸)是一种重要的功能性非蛋白质氨基酸，作 本课题组从乳酸酸菜发酵液中分离出一株短乳杆 为中枢神经系统重要的抑制性神经递质，能通过突触后 菌，其发酵液经氨基酸分析仪检测，可产生GABA， 膜超极化、减少离子内流和降低细胞代谢等机制，使 但含量较低(2.2mg/100g)。因此，本研究利用GABA与 得神经元处于保护抑制状态。大量的研究已经表明， 衍生化试剂邻苯二甲醛(OPA)反应生成具有较强荧光活性 GABA具有增进脑活力和长期记忆、安神抗抑郁、调 衍生化产物的原理，采用柱前衍生高效液相色谱法来检 节激素分泌、改善脂质代谢、降血压、治疗癫痛和改 测该乳酸菌发酵液中的痕量GABA，为进一步通过育种 [1-2] 来提升该菌产GABA的能力奠定方法基础。 善更年期综合症等重要的生理功能 ，以GABA为主要 成分的功能性食品和以GABA为中间体的药物，也相继 1 材料与方法 被开发并得到了广泛的应用。GABA存在的范围很广， [3] [4] [4] 植物 、动物 、微生物代谢产物中 、均有GABA的 1.1试剂与仪器 存在、但含量不一。近年来益生菌乳酸菌发酵液中存 γ-氨基丁酸标准品 国药集团化学试剂有限公 [5] 在GABA的报道也屡见不鲜 。目前测定GABA的方法 司；甲醇为色谱纯试剂；邻苯二甲醛(OPA)为化学纯； [6] 有 ：放射受体法、薄层扫描法、高效液相色谱法、 其他试剂均为分析纯；所有用水均为MillinQ超纯水。 氨基酸分析仪和气相色谱-质谱连用法。其中高效液相 Waters高效液相色谱仪(包括 色谱法是最常用的方法，但因GABA直接检测灵敏度 PUMP、柱温箱、WATERS 470荧光检测器和