HPLC测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸含量的质量评价指标.doc

HPLC测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量及其质量评价指标 吕光华 1, 2 (，程世琼 3，陈金泉 2，梁士贤 2，赵中振2 (1. 成都中医药大学 药学院 中药材标准化教育部重点实验室，四川 成都611137; 2. 香港浸会大学 中医药学院，香港 九龙塘; 3. 四川省食品药品检验所，四川 成都610036) [摘要] 目的：建立HPLC测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸的方法，测定不同来源的川芎样品，以期研究其质量评价指标。方法：用甲醇-甲酸（95 ( 5）和甲醇–0.24 mol.L-1碳酸氢钠水溶液（95 ( 5）分别提取川芎样品中的游离阿魏酸和总阿魏酸。HPLC采用Alltima C18 (4.6 mm × 250 mm，5 μm) 色谱柱，保护柱为C18 (4.6 mm × 7.5 mm，5 μm)；以乙腈和1%冰醋酸水溶液为流动相，梯度洗脱；流速为1.0 mL.min-1；柱温为30 oC；测定波长为320 nm；进样量为10 μL；以外标法测定样品中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量。结果：游离阿魏酸和总阿魏酸分别在0.01 ~ 0.20 μg和0.05 ~ 0.46 μg呈线性关系，回收率分别为95.7和98.5% (n = 6)。32份川芎药材和饮片中总阿魏酸与游离阿魏酸的含量之比为1.03 ~ 4.98，平均值为2.38 (n = 32); 1份川芎栽培苓子中二者之比值达19.6。15份从川芎主产区收集的根茎药材中总阿魏酸的平均质量分数为1.42 mg.g-1，按平均值的80%和药材含水量10%计算，则川芎药材中总阿魏酸的含量以干燥品计为1.25 mg.g-1。结论：本方法可测定稳定、具有可比性的阿魏酸含量，操作简便，适合于川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量测定。阿魏酸在川芎样品中以游离和结合型共同存在，但以后者为主，并以总阿魏酸的量发挥药效，故应以总阿魏酸为川芎药材和饮片质量评价的指标。 [关键词] 川芎；游离阿魏酸；总阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定；质量评价 川芎为常用的活血化瘀药，来源于伞形科植物川芎 (Ligusticum chuanxoing Hort.) 的干燥根茎 [1]。现代化学和药理研究结果表明，川芎的活性成分主要包括苯酞类、酚酸类和生物碱类成分[2-3]。虽然对川芎中藁本内酯 (ligustilide)、阿魏酸 (ferulic acid) 和川芎嗪 (ligustrazine) 含量测定的文献报道较多 [4-10], 但是在《中国药典》（2005年版）中川芎仍然没有质量控制的指标成分[1]。作者研究了大量的相关文献，认为其原因在于藁本内酯不稳定，对照品难以保存，纯度下降；阿魏酸对照品稳定，但报道的测定方法准确性差，结果误差大；川芎嗪被认为是川芎药材的特征性成分，但具有升华性，供试液制备的步骤多，定量分析的结果误差大。作者曾对当归中藁本内酯和阿魏酸的测定方法进行过深入研究[11-13]，认为阿魏酸可最先作为川芎药材和饮片质量评价的指标性成分。台湾《中华中药典》（2004年版）中将阿魏酸大于0.07%规定为川芎药材的质量控制指标 [14]。为此，本研究建立了准确、快速地用HPLC测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸含量的方法，并测定了33份不同来源的川芎药材、饮片和栽培苓子样品，分析了川芎药材和饮片的质量与阿魏酸含量的相关性，提出了评价川芎药材质量的总阿魏酸含量指标，以期为制定川芎药材的质量标准提供科学依据。 1 仪器与材料 Agilent 1100型高效液相色谱仪 (美国)，配置G1322A真空在线脱气机，G1312A四元梯度泵，G1329A自动进样仪，G1316A柱温箱，G1315A二极管阵列检测器。电子分析天平为德国Satorius (d = 0.1 mg, CP224S) 和瑞士Mettler Toledo (d = 1 μg, MT5)。超声提取器为Branson 5510E-MTH型（美国）。阿魏酸对照品购于中国药品生物制品检定所（北京），其纯度用HPLC色谱峰的面积归一化法计算大于98.0%。甲醇（分析纯）和乙腈（色谱纯）为Lab-scan (泰国)，分析纯的甲酸、冰醋酸和碳酸氢钠为Uni-chem (波兰); 纯净水由Millipore净水器 (美国)产生。 33份川芎样品从川芎的道地产区四川省都江堰市、彭州、崇州和非地道产区以及香港不同公司收集 (表1)，由香港浸会大学中医药学院赵中振教授和吕光华博士鉴定。 2 方法 2.1 色谱条件 Alltima C18 色谱柱(4.6 mm × 250 mm, 5 μm)；C18保护柱(4.6 mm × 7.5 mm，5 μm)；流动相由乙腈和1%冰醋酸水溶液组成，梯度洗脱，0 ~ 1