羊肚菌制种技术规程.docx
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DB43/XXXXX—2020
羊肚菌菌种生产技术规程
1范围
本标准规定了羊肚菌菌种生产的一般要求和母种、原种、栽培种生产管理与档案记录等要求。本标准适用于湖南省羊肚菌制种生产。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T4789.28食品卫生微生物学检验GB5749生活饮用水卫生标准
GB/T12728食用菌术语
NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1742食用菌菌种通用技术要求NY/T1846食用菌菌种检验规程
NY/T1935食用菌栽培基质质量安全要求SN/T1538.1培养基制备指南
SN/T2632微生物菌种常规保藏技术规程
3术语与定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
羔羊早期断奶
羔羊30日龄停止母乳，使用羔羊代乳料代替母乳饲喂羔羊到90日龄。3.2
菌种Bacterialspecies
生长在适宜基质上具有产生子实体的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。
3.3
母种Stockculture
经各种方法选育得到的具有产生子实体的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。
3.4
原种Motherspawn
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由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。3.5
栽培种Plantingspawn
由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称三级种，栽培种只能用于栽培、不可再次扩大繁殖菌种。
4一般要求
4.1从业人员要求
4.1.1应有与菌种生产级别相适应的2名以上（含2名）生产技术人员和1名以上（含1名）检验人
员。
4.1.2生产技术人员和检验人员经省级人民政府农业行政主管部门考核合格。检验人员应具有相关专
业大专以上文化水平或者具有中级以上专业技术职称。
4.2生产经营单位要求
4.2.1从事菌种生产经营主体，应当取得《食用菌菌种生产经营许可证》。
4.2.2从事栽培种经营的单位，可以不办理《食用菌菌种生产经营许可证》，但经营者要具备菌种的
相关知识，具有相应的菌种贮藏设备和场所，并报县级人民政府农业农村行政主管部门备案。
4.3生产环境要求
羊肚菌菌种生产场地选择、厂房设置和布局、设备设施应符合NY/T528的规定。
4.4菌种来源
4.4.1购买菌种应从具有相应资质的供种单位引进，选择抗逆性强、抗杂菌力强，优质高产、适合当
地栽培的优良羊肚菌菌株，菌种质量应符合NY/T1742的要求。
4.4.2自制菌种应符合《食用菌菌种管理办法》的规定，通常采取羊肚菌孢子分离法和组织分离法，
羊肚菌孢子分离法即采集成熟羊肚菌，挂在带培养基的玻璃培养盅中，在25℃~30℃环境中挂10min，在24℃环境中培养20h后，在显微镜下选取孢子培养；组织分离法即采集成熟羊肚菌，用百分之七十五的乙醇擦拭羊肚菌表面，再用手术刀切取羊肚菌组织0.5cm大小数块，放在羊肚菌培养基试管中18℃培养，经过一次提纯即可，再经过出菇试验验证，即可作为母种保存或者使用。
5母种生产
5.1工艺流程
培养基配制→分装→灭菌→摆斜面冷却→接种→培养→成品。
5.2培养基配制
常用母种培养基及其配方参见附录A。
5.3分装与灭菌
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采用规格为18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃试管，试管用硅胶塞封口。将配制好的培养基立即分装，装量为试管长度的1/4～1/5。试管口应保持干净，随后塞入硅胶塞，并用牛皮纸包扎。将分装包扎好的试管直立放入高压灭菌锅内（压力0.12Mpa～0.15Mpa、温度121℃~126℃),灭菌25min～30min。
5.4斜面摆放
灭菌结束后自然冷却，压力表指针降至OMpa时，打开排气阀，在培养基温度降到6O℃左右时取出试管摆斜面，斜面长度不超过试管长度的2/3。
5.5接种
接种设施设备消毒流程应按照NY/T528的规定执行。接种时应无菌操作，接种后及时贴好标签，标签应注明菌株名称及接种时间。1支母种扩繁一般25支试管左右，5支试管。
5.6培养
接种后置于培养箱或培养室培养，设置温度18℃~22℃,避光培养5d～7d，定期检查，清除污染试管，待菌丝长满试管斜面，稳定3～5d，即可用于原种生产。
6原种生产
6.1工艺流程
基质配制→装瓶→灭菌→冷却→接种→培养→成品。
6.2基质