文冠果果壳总皂苷分离工艺及其抗氧化活性的研究的中期报告.docx

文冠果果壳总皂苷分离工艺及其抗氧化活性的研究的中期报告 本实验的目的是研究文冠果果壳总皂苷的分离工艺以及其抗氧化活性。具体步骤如下： 1. 提取文冠果果壳总皂苷 将文冠果果壳粉末与95%乙醇在70°C下浸泡3小时，分别用超声波和搅拌的方式使固体和溶液混合均匀，然后过滤分离，得到提取液。接下来用BSA法测定总皂苷含量，取适量提取液加入diammonium phosphate和硫酸铬酸混合液中，乳化2分钟后测定OD值，用标准曲线计算出总皂苷含量。 2. 制备文冠果果壳总皂苷粗提物 将提取液用RO水稀释后加入乙酸铵进行均相沉淀，待沉淀物沉淀后离心收集，用醇弃滤液，沉淀物即为粗提物。 3. 分离文冠果果壳总皂苷 将粗提物用几何梯度柱层析法进行分离，以20%、40%、60%、80%、95%的乙酸乙酯-乙醇溶液进行梯度淋洗。每次梯度淋洗后收集柱液，分别测定总皂苷含量，然后进行聚集分析，将纯化后的化合物进行结构表征和理化性质测定。 4. 测定文冠果果壳总皂苷的抗氧化活性 采用DPPH法和超氧阴离子自由基清除能力测定文冠果果壳总皂苷的抗氧化活性，具体操作步骤如下： (1) DPPH法：将文冠果果壳总皂苷溶液与DPPH乙醇溶液混合，搅拌均匀后，在室温下静置30分钟，测定OD值，即可计算出清除率。 (2) 超氧阴离子自由基清除能力：将文冠果果壳总皂苷与色氨酸乙酰甲基酯反应，制备自由基产生体系，然后加入文冠果果壳总皂苷，测定OD值，即可计算出清除率。 目前，已经完成了前两个步骤，成功提取到文冠果果壳总皂苷粗提物，并进行了总皂苷含量测定。接下来，将进行第三和第四步，分离和测定文冠果果壳总皂苷的活性，以探究其潜在的抗氧化特性。