鸡硒蛋白W基因克隆表达及单克隆抗体制备与鉴定的中期报告.docx

鸡硒蛋白W基因克隆表达及单克隆抗体制备与鉴定的中期报告 本中期报告主要介绍了鸡硒蛋白W基因克隆表达、单克隆抗体制备与鉴定的研究进展。 一、鸡硒蛋白W基因克隆表达 本研究采用RT-PCR技术从鸡肝脏组织中克隆出鸡硒蛋白W基因的全长cDNA序列。将该序列克隆到pET-32a(+)表达载体中进行表达。经过表达优化，我们获得了较高的表达水平。 二、单克隆抗体制备 1. 免疫原制备 采用纯化的重组鸡硒蛋白W作为免疫原。将免疫原与佐剂混合后注射到BALB/c小鼠体内进行免疫。 2. 细胞融合 采用骨髓细胞与SP2/0细胞进行细胞融合。经过DHFR筛选筛选，我们获得了多个克隆细胞。 三、单克隆抗体鉴定 1. 酶联免疫吸附试验法（ELISA） 将纯化的鸡硒蛋白W和其他蛋白质进行ELISA检测，结果表明所得单克隆抗体的特异性和亲和力较高。 2. Western blotting 通过Western blotting方法检测单克隆抗体的特异性，结果显示单克隆抗体可以特异性地识别鸡硒蛋白W。 综上，我们已经成功克隆表达了鸡硒蛋白W基因，并制备了具有特异性和亲和力的单克隆抗体。下一步计划将该单克隆抗体应用于对鸡硒蛋白W的生物学功能和代谢机制的研究。