NY_T 2008-2011万寿菊及其制品中叶黄素的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2008—2011万寿菊及其制品中叶黄素的测定高效液相色谱法Determination of lutein in marigold raw material and its derived productby high performance liquid chromatography2011-12-01实施2011-09-01 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 2008—2011前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：云南省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、农业部农产品质量监督检验测试中心(昆明）。本标准主要起草人：刘宏程、邹艳虹、黎其万、严红梅、邵金良。 NY/T 2008—2011万寿菊及其制品中叶黄素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了万寿菊及其制品中叶黄素的高效液相色谱测定方法。本标准适用于万寿菊及其制品中叶黄素的测定。本标准方法的定量测定范围为0.1mg/100g~250mg/100g，本标准方法的定量限为0.1mg/100g，本标准方法的仪器检出限为0.02mg/100g。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样在碱性条件下加热水解，使各种叶黄素酯完全水解为游离叶黄素，二氯甲烷萃取，用具紫外/可见波长检测器（UV/VIS)的高效液相色谱检测，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，使用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1氢氧化钠(NaOH)。4.2异丙醇(C.HgO)。4.3二氯甲烷(CH2Cl2）。4.4氢氧化钠溶液[c(NaOH)=4.0mol/L]：称取16.0g氢氧化钠，加水溶解并稀释至100mL。4.5无水硫酸钠（NaSO4）。4.6叶黄素标准品（CkoH5O2）：纯度≥95%。4.7叶黄素标准储备液：准确称取叶黄素标准品0.01g(准确至0.1mg)置于10mL烧杯中，加二氯甲烷（4.3)溶解，转移到10mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度，配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备液。该贮备液在一18℃避光条件下，可稳定储藏2个月。4.8叶黄素标准工作液：根据试样中叶黄素的含量，准确吸取适量的标准储备液，用二氯甲烷（4.3)稀释为质量浓度分别为0.5mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L或者25.0mg/L、100.0mg/L、250.0mg/L的标准工作液。该标准工作液4℃避光条件下，可稳定储藏3d。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：带紫外/可见波长检测器(UV/VIS)。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 NY/T 2008—20115.3旋转蒸发仪。5.4高速离心机：最大转速≤6000rpm。5.5恒温水浴锅。5.6滤膜过滤器：备孔径为0.45μm，有机相。6试样制备万寿菊干花制品和含万寿菊制品按GB/T14699.1方法采样，按GB/T20195方法粉碎成全部能通过0.425mm筛的试样，混匀，装人密闭容器中，避光，室温下保存。7分析步骤7.1试样处理7.1.1碱水解准确称取0.5g试样（准确到1mg），置于25mL圆底烧瓶中，准确加入5mL异丙醇（4.2），轻轻摇匀，滴加1.0mL氢氧化钠溶液（4.5)溶液，联接上蛇形冷凝管，于78℃土2℃水浴中加热水解30min。7.1.2萃取将上述水解液（7.1.1)在冷水中快速冷却到室温，过滤，滤液转移至100mL离心管中。用30mL二氯甲烷（4.3)分两次涮洗圆底烧瓶并转移至离心管中，加人20mL水，摇匀。在高速离心机以6000rpm速度离心3min，分取上层液体到另一离心管中，加人20mL二氯甲烷（4.3），摇匀。再次离心，合并二氯甲烷相（下层），加人25g无水硫酸钠干燥，在40℃水浴中旋转蒸发，浓缩至5mL。转移至10mL刻度试管中，以二氯甲烷定容至刻度，经0.45μm滤膜(有机相)过滤，待高效液相色谱测定。7.2测定7.2. 1色谱参考条件a）色谱柱：Cl柱，4.6mm×250mm，5μm，或与之性能相当者；b)柱温：30℃；c)流动相：甲醇一水一乙腈=9十7十84；d)流速：1.0mL/min;；e）进样量：10μL；f)检测波长：445nm。7.2.2色谱分析分别取标准工作液和试样处理液注入高效液相色谱仪，以标准工作液的峰面积对质量浓度绘制标准工作曲线，以试样处理