NY_T 2336-2013柑橘及制品中多甲氧基黄酮含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.080.10B 31NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2336-2013柑橘及制品中多甲氧基黄酮含量的测定高效液相色谱法Determination of polymethoxylated flavones in citrus andderived products—HPLC2013-05-20 发布2013-08-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2336—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。-本标准由农业部种植业管理司提出。本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC/TC501)归口。本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心、西南大-学。本标准主要起草人：焦必宁、赵其阳、苏学素、陈爱华、王成秋、张耀海、薛杨、陈卫军。I NY/T2336—2013柑橘及制品中多甲氧基黄酮含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了柑橘及其制品中多甲氧基黄酮（甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮)含量的液相色谱测定方法。本标准适用于柑橘及其制品中多甲氧基黄酮(甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮)含量的测定。本标准定量测定范围：甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮均为0.02mg/L～30mg/L。本标准方法定量限：甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮均为0.02mg/kg。本标准方法检出限：甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮均为0.01mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的多甲氧基黄酮经甲醇超声提取、净化、微孔滤膜过滤，高效液相色谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇(CHsH)，色谱纯。4.2乙酸溶液Lg(CH;CO)H)=0. 5%]:量取 5mL 乙酸,定容至 1 000mL。4.3川皮苷标准品（纯度≥96.0%）。4.4蜜橘黄酮标准品（纯度≥96.0%）。4.5甜橙黄酮标准品（纯度≥96.0%）。4.6多甲氧基黄酮标准储备溶液：分别称取5.00mg（精确到0.01mg)甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮标准品，溶于甲醇中，用甲醇定容至50ml.，配制成质量浓度为100mg/L的标准储备液。于一50℃冰箱中贮存，有效期3个月。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：带紫外检测器（UV)。5.2分析天平：感量0.001g和0.00001g。5.3组织捣碎机。5.4超声波清洗器。5.5旋转蒸发仪。5.6超低温冰箱。5.7离心机。1 NY/T 2336—20135.8滤膜:0.45 μm,有机相。6分析步骤6.1试样制备6.1.1鲜果果实样品：果皮、果肉和种子分开处理。按四分法缩分后将其切碎，放入组织捣碎机中捣成匀浆后取样。6.1.2罐头样品：样品放人组织捣碎机中匀浆后取样。6.1.3果汁及饮料样品：充分混匀后直接取样。6.2提取6.2.1鲜果果皮、种子称取试样1g（精确到0.001g）手50.ml.离心管中，加人甲醇10.00mL，50℃条件下超声处理30min，以10000r/min离心10min，收集上清液于容量瓶中，残渣以10ml，甲醇重复提取两次，合并上清液，用甲醇定容至50ml，0.45um微孔滤膜过滤后待测。6.2.2果肉、罐头、果汁及饮料称取试样5g（精确到0:001g)于50mL离心管中，加人10.00ml甲醇，超声处理10min，以10000r/min离心10min，收集上清液于容量瓶中，残渣以10mL甲醇重复提取一次，合并上清液，用甲醇定容至25mL。取提取液10mL，在50℃下减压旋转浓缩至近干，加入甲醇2.00mL过0.45um微孔滤膜后待测。6.3仪器参考条件色谱柱：Cs色谱柱（4.6mm×250mm，粒度5um）或同等性能的色谱柱。柱温：35℃。进样量：10uL。检测波长：330nma流动相：见表1。表1流动相梯度洗脱程序B相(甲醇)时间流速A相（乙酸溶液）%mL/ ninmin601001. 0065151. 003.510 90161. 009010201. 006040211. 004025601. 006.4#标准工作曲线取标准储备溶液（4.6)用甲醇稀释配成质量浓度为0.02mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L、2.5mg/L、10.0mg/I.、20.0mg/L、30.0mg/L的标准工作溶液，按6.3进行测定。以甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮质量浓度为横坐标，相应的积分峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或求线性回归方程。6.5测定取10uL相应的标准工作溶液和待测液顺序进