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流动注射化学发光检测硫酸特布他林 1 纳米银在鲁米诺-k3fecn6体系的应用 传统的观点将化学发光研究局限于分子层面。在接下来的几年里，越来越多的研究人员开始关注纳米材料对化学发光的影响。研究表明,由于纳米材料的表面效应和特殊结构,它能显著增强化学发光反应本身的发光强度,提高化学发光的灵敏度和稳定性。Zhang等将纳米金加入鲁米诺-H2O2体系中,该发光体系的发光强度明显增强;Guo等将纳米银加入鲁米诺-H2O2体系中,对该发光体系也有很强的增敏作用,但将纳米银用于鲁米诺-K3Fe(CN)6体系的研究还未见报道。 硫酸特布他林(Terbutaline sulfate),作为一种较高选择性的β-肾上腺素受体激动剂,有舒张支气管作用,临床用于治疗支气管哮喘、慢性和喘息性支气管炎、肺气肿等疾病。同时它能促进动物体蛋白质沉积,抑制脂肪沉积,因此曾被用作猪饲料添加剂,提高猪酮体的瘦肉率。但硫酸特布他林可造成尿液、肌肉及组织中有不同程度的残留,我国农业部公告第176号中,已经明确禁止其在饲料和动物饮用水中使用。目前,检测硫酸特布他林方法有紫外分光光度法、电泳法、液相色谱法以及化学发光法,上述方法各有优点,但得到的检出限也只能达到5.7×l0-7g/L,不能满足痕量药物残留检测的要求。本研究将纳米银应用于鲁米诺-K3Fe(CN)6发光体系,显著增强了该体系的发光强度,并以此建立了痕量硫酸特布他林的分析方法。本方法的灵敏度高,且保持了流动注射化学发光简单、快速的优点。 2 实验部分 2.1 药品、试剂与标准品 IFFM-E型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子科技有限公司);DF-101S磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限公司);JEM-2100透射电子显微镜(日本JEOL公司);F-4500荧光分光光度计(日本日立公司);Lambda-25型紫外可见分光光度计(美国Perkin-Elmer公司);AJY-6000-U高端超纯水系统(艾科浦公司);KQ-2200B超声波清洗器(巩义市英峪予华仪器厂)。 硫酸特布他林标准品(中国药品生物制品检定所);鲁米诺(BC,苏州工业园区亚科化学试剂有限公司);K3Fe(CN)6(上海润捷化学试剂有限公司)、Ag NO3(广东汕头市西陇化工厂);柠檬酸钠(广东汕头市西陇化工厂);Na BH4(国药集团化学试剂有限公司)。所用试剂均为标准品或分析纯,水为超纯水。 2.2 实验方法 2.2.1 稳定试剂的制备 将25 m L 1.0 mmol/L Ag NO3溶液逐滴加到高速搅拌的75 m L2 mmol/L Na BH4溶液。10 min后,再加入5 m L 1%(w/w)柠檬酸钠溶液作为稳定试剂。继续搅拌20 min后,将得到的纳米银溶胶放在4℃冰箱中保存,熟化2 d后使用。 2.2.2 硫酸特布他林对诺、纳米银的化学发光强度的影响 流动注射化学发光分析系统的流路如图1所示,分别将载流(水)、K3Fe(CN)6、鲁米诺以及纳米银通过相应的管道输入分析系统,待基线稳定后,注入样品溶液,记录反应的发光信号,其中将未加入硫酸特布他林时体系产生的化学发光强度定义为本体发光值I0,而将硫酸特布他林加入到发光体系中得到的的化学发光强度定义为I,则增加的化学发光值ΔI=I-I0。 3 结果与讨论 3.1 纳米银粒子的形貌 图2为所制备的纳米银透射电子显微镜分析照片。由图2可见,实验制备的纳米银粒子粒径在10~20 nm之间,形状近似于球形,并且分散性较好,无明显的团聚现象。 3.2 纳米银溶胶体系的化学发光强度 考察了鲁米诺-K3Fe(CN)6化学发光体系在加入纳米银溶胶前后发光强度的变化。如图3所示,加入纳米银溶胶后体系的化学发光强度(曲线3)比没有加入纳米银溶胶体系的化学发光强度(曲线1)明显增强。 为了验证这种增强作用来自于纳米银粒子本身,而不是来自与纳米银溶胶共存的其它物质。在纳米银溶胶中加入约0.1 mol/L KNO3,沉淀纳米银。过滤后取滤液注入鲁米诺-K3Fe(CN)6体系(图3曲线2)。结果表明,滤液对此发光体系仅有很弱的增强作用,与纳米银溶胶的增强作用相比完全可以忽略。 3.3 试验条件的选择 3.3.1 纳米银-鲁米诺-k3fecn6体系的化学计量特征 用IFFM-E型流动注射化学发光分析仪的静态测量系统研究了硫酸特布他林-纳米银-鲁米诺-K3Fe(CN)6体系的化学发光反应动力学性质,其发光反应动力学曲线如图4所示。图4中曲线1是纳米银-鲁米诺-K3Fe(CN)6体系的化学发光动力学曲线,曲线2是在硫酸特布他林存在下纳米银-鲁米诺-K3Fe(CN)6体系化学发光动力学曲线。由图4可见,两个体系的反应均为快速化学发光反应,从试剂混合到化学发光信号达到最大值仅需7 s,再经过4 s左右化学发光信号迅速