第章放射免疫技术.ppt

* 临床免疫学与免疫学检验 * 以标准抗原的不同浓度为横坐标，反应参数为纵坐标作图。待检标本在标准曲线图上查出相应的受检抗原浓度。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 图RIA标准曲线 * 临床免疫学与免疫学检验 * 第三节　 免疫放射分析 免疫放射分析（IRMA）是在放射免疫分析（RIA）的基础上发展起来的核素标记免疫测定，其特点为用核素标记的过量抗体直接与受检抗原反应，并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段。 　　 * 临床免疫学与免疫学检验 * 一、基本原理　　单位点IRMA的原理 抗原与过量的标记抗体在液相反应后，加入免疫吸附剂（固相上的抗原），结合游离的标记抗体，离心除去，测定上清液的放射性强度。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 标记抗体 抗原 固相抗原 上清液 沉淀物 * 临床免疫学与免疫学检验 * 双位点IRMA的原理： 固相抗体-受检抗原-核素标记的抗体，反应后洗涤除去游离的标记抗体，测定固相上的放射性。　　单位点、双位点IRMA，测得的放射性与受检抗原的量呈正比。 * 临床免疫学与免疫学检验 * * 临床免疫学与免疫学检验 * 　　 二、IRMA与RIA的异同点　　1．标记物 RIA-核素标记抗原，IRMA-核素标记抗体 2．反应速率（与反应物浓度成正比） IRMA反应速度较RIA快。 　　3．反应模式（原理） RIA为竞争抑制性结合，反应参数与待检抗原呈反比；IRMA为非竞争性结合，反应参数与待检抗原呈正比。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 　 4．特异性 IRMA（针对不同表位的双抗体），受交叉反应物的干扰小，特异性较RIA高。　　5．灵敏度和检测范围 IRMA（非竞争性，结合充分）灵敏度较RIA高。 IRMA（抗体量大）检测范围较RIA宽。 　　 * 临床免疫学与免疫学检验 * 6.其他 RIA法抗体用量少，需亲和力高；IRMA法抗体用量大，亲和力要求不及RIA法。RIA检测大、小分子抗原；IRMA法检测至少有两个抗原决定基的抗原。 * 临床免疫学与免疫学检验 * RIA IRMA 反应原理 竞争性结合 非竞争性结合 反应参数与待检抗原 呈反比 呈正比 标记物 抗原 抗体 反应速度 较慢 快 特异性 较高 高 检测范围 窄 宽1~2数量级 待测抗原 大小分子抗原 抗原（两个抗原决定基） 灵敏度 较高 高 ★RIA与IRMA的特性比较 * 临床免疫学与免疫学检验 * 大纲要求 掌握：标记物、RIA、IRMA、放射化学纯度、比放射性的概念，放射免疫技术基本类型及原理，放射免疫分析及免疫放射分析的原理及RIA与IRMA的比较（异同点）。 熟悉：常用的放射性核素，标记物的制备及鉴定。 了解： 方法学评价。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 思考题： 1、试述放射免疫技术标记物制备的原理。 2、简述RIA、IRMA的原理。 3、放射免疫分析中B与F分离技术的种类有哪些？ 4、试比较IRMA与RIA的异同。 临床免疫学与免疫学检验 * * 第七章　放射免疫技术 教师 袁桂峰 临床免疫学及免疫学检验 * 临床免疫学与免疫学检验 * 免疫标记技术：标记技术（微量检测的 示踪物标记抗原或抗体）与免疫学技术（特异性）相结合所建立的分析技术。 核心：高度特异性和高度灵敏性。 据待检物分：免疫组化技术与免疫测定。 按示踪物分：放射、荧光、酶、化学发光和金免疫技术等。 按是否使用放射性核素分：放射性与非放射性免疫测定。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 第一节 放射免疫技术 　 放射免疫技术是利用放射性核素标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。该技术是将放射性核素探测的灵敏性与抗原抗体结合的特异性相结合，用于微量或超微量生物活性物质（蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物）的定量分析。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 一、基本类型及原理 放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素标记的抗原与受检标本中的抗原去竞争结合相应的抗体，从而定量测定受检标本中的抗原，属竞争性放射免疫技术。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 免疫放射分析（immunoradiometric assay，IRMA）以放射性核素标记过量的抗体与待测抗原直接结合后，采用固相的免疫吸附载体分离结合与游离的