中平树中东莨菪内酯分离鉴定与`含量测定.doc

中平树中东莨菪内酯的分离鉴定及含量测定 　　摘要：采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从中平树[Macaranga denticulata （Bl.） Muell. Arg.]中分离得到一种香豆素类化合物，根据理化性质及光谱数据鉴定其为东莨菪内酯。并采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇∶0.1%冰醋酸（39∶61）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长345 nm的色谱条件，用HPLC法测定中平树中东莨菪内酯的含量。结果表明，东莨菪内酯在1.45～7.24 μg/mL范围内与其峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.18%，RSD为1.18%（n=6）。该方法简便、准确、快速，可用于中平树药材的质量控制 关键词：中平树[Macaranga denticulata （Bl.） Muell. Arg.]；东莨菪内酯；分离纯化；高效液相色谱法 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）18-4805-03 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.044 中平树[Macaranga denticulata（Bl.） Muell. Arg.]为大戟科血桐属植物，又名血桐、糠皮树、赖麻、牢麻等，分布于广东、广西、贵州、云南、西藏等地。其根味苦，性凉。具有清热利湿、退黄的功能，主治黄疸型肝炎，胃脘疼痛[1]。广西民间主要用其根部治疗黄疸性肝炎方面的疾病[2]，应用前景广阔。为探明中平树根的化学物质基础，本试验从中平树药材中分离鉴定得到了东莨菪内酯，并采用高效液相色谱法对其含量进行了测定，该方法可用于中平树药材的质量控制 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 中平树采自广西马上县，由广西中医药研究院何开家主任中药师鉴定为中平树。东莨菪内酯对照品为从中平树中提取分离获得，经结构鉴定并采用HPLC归一化法测得含量大于98%后使用；甲醇为色谱纯；水为去离子水；其余试剂为分析纯 1.2 仪器 IR-470型红外光谱仪、LC-10AT型高效液相色谱仪、威玛龙色谱工作站、AUW220D型分析天平、AEL-200型分析天平（日本岛津公司），DRX-500MHz型超导核磁共振仪（瑞士布鲁克公司），ZDM-83-1型电热熔点仪（江苏科教玻璃仪器厂），KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆明市超声仪器有限公司），HH-S2型数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），SHB-III型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司） 1.3 方法 1.3.1 提取分离 中平树粉碎成粗粉，称取12 kg，加8倍体积95%乙醇浸泡过夜后加热回流提取4次，每次2 h，合并提取液，减压回收乙醇，得浸膏。浸膏加入海沙使其分散均匀，依次用石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯回流提取，回收溶剂后分别得到石油醚部位及乙酸乙酯部位。取乙酸乙酯部位进行硅胶柱色谱分离，用石油醚（60～90 ℃）―乙酸乙酯混合溶剂（100∶0→70∶30）梯度洗脱，共收集265个流分。采用薄层鉴别将各流份分别合并，将第150流份到第183流份合并，反复柱层析及重结晶得到黄色针状结晶 1.3.2 对照品溶液的制备 精密称取东莨菪内酯对照品3.62 mg置于250 mL量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为14.48 μg/mL的对照品储备液，备用。精密量取14.48 μg/mL的对照品储备液3.0 mL置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为4.34 μg/mL的对照品溶液 1.3.3 供试品溶液的制备 精密称定中平树药材粉末（过40目筛）2.0 g，置烧瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，置烧瓶中，浓缩至约1 mL，加3 mol/L盐酸溶液10 mL，水浴中加热水解1 h，立即冷却，移入分液漏斗中，用水10 mL洗涤容器，并入分液漏斗中，用氯仿强力振摇5次，每次15 mL，合并氯仿液，立即加甲醇使溶解，转移至10 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得 1.3.4 色谱条件 采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇∶0.1%冰醋酸水溶液（39∶61），流速1.0 mL/min，柱温为室温，检测波长345 nm。分别精密吸取东莨菪内酯对照品、供试品和空白溶液各10 μL，进样分析，记录色谱图（图1、图2）。理论塔板数按东莨菪内酯计算应不低于3 000，东莨菪内酯峰与相邻峰的分离度大于1.5，供试品中其他成分不干