氨基酸含量的测定及分离鉴定.pptx

——纸层析法

通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法目的01纸层析法是利用各物质不同的分配系数，使混合物随流动相时而得到分离的方法。纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的。滤纸纤维与水亲和力较强，而与有机溶剂亲和力弱，所以纸层析以滤纸纤维和结合水为固定相，以有机溶剂为流动相。当有机相沿滤纸流动经过样品点时，样品点上的溶液在水相和有机相之间进行分配，样品移动速率与样品的极性及水亲和力有关，因此，极性氨基酸移动较慢，而非极性氨基酸移动较快。物质被分离后在纸层析图上的位置用Rf值表示Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿距离在一定条件下某种物质的Rf值是常数原理02

溶液前沿层析点原点溶剂前沿苯丙氨酸丙氨酸天冬氨酸

器材层析缸2毛细管3喷雾器培养皿5层析滤纸030102

操作步骤1取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2-3㎝处用铅笔划一条直线，在直线上约每隔3-4㎝做一次记号，共记四次。2用毛细管将各种氨基酸样品分别点在4个记号点上，干后再点一次。尽量点成圆形，并在各点表上样品名。3手通过纸将滤纸卷成圆筒形，并用针缝，共3针。每缝一针打个结，第三针的线留长一点。4将缝好的纸（装入）垂直放入装有扩展剂的层析缸内（点样的一端朝下，滤纸不应碰到缸壁）5约2个小时后，将滤纸取出，拆掉线后，放入烘干机内烘干，约10分钟后取出即显色。6画出溶液前沿线，确立个层析点中心，计算各氨基酸的Rf值

原点到溶剂前沿距离为L，原点到层析点中心距离为d丙氨酸苯丙氨酸天冬氨酸L/㎝d/㎝Rf

氨基酸的定量分析—甲醛滴定法目的：初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点

实验原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

01若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。02脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。

（一）试剂1、0.5%酚酞酒精溶液称0.5g酚酞溶于100ml50%酒精中。2、0.1mol/L甘氨酸溶液取3.75g甘氨酸溶于500ml蒸馏水。3、标准0.0200mol/L氢氧化钠溶液4、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.01mol/LNaOH溶液，使溶液呈微红色，临用前中和。（二）实验器具锥形瓶、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯

四、操作步骤锥形瓶编号试剂123450.1mol/L甘氨酸溶液/mL01100中性甲醛溶液/mL11111水/mL32222