微生物与免疫学复习 微免实验二.ppt

实验二 细菌形态观察与分离培养（一） 普通肉汤培养基的制备（实验 5.2） 讲解 细菌的接种和培养（实验 5.3） 细菌培养技术 示教 平板、斜面、半固体和肉汤接种 1套/人 3. 细菌的生化反应（实验7） 结果示教 糖发酵 IMViC [ 吲哚(I)、甲基红(M)、乙酰甲基甲醇(Vi)、枸橼酸(C)] 硫化氢 4. 消毒与灭菌（实验 8） 示范与讲解 按配方称量 牛肉膏 0.3~0.5 g 蛋白胨 1g NaCl 0.5 g 加蒸馏水(100 ml) 溶解 过滤 调PH值（7.4） 分装 灭菌：高压蒸汽灭菌 （103.42 kPa，121.3 ℃，15-20 min） 抽样检查 a) 无菌试验 b) 细菌生长试验 一、普通肉汤培养基液的制备 二. 培养基的类型及其主要应用 平板（液体培养基 + 1.5%～2.5%琼脂） — 细菌分离（混合菌） 斜面（液体培养基 + 1.5%～2.5%琼脂） — 纯培养、菌种保存（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌） 半固体（液体培养基 + 0.3%～0.7%琼脂） — 动力观察、菌种保存（金黄色葡萄球菌、枯草杆菌） 肉汤（液体培养基） — 增菌、生化反应（枯草杆菌、大肠埃希菌） 平板 斜 面 液体 半 固 体 1. 平板分区划线法 细菌分离（混合菌） 菌落观察 接种环、接种针 烧灼灭菌 结果观察： 整体：平板是否划破；分区是否合理；划线是否规范 菌落：是否有单个独立的菌落长出；菌落的形态、颜色、大小、边缘、透明度等特征，并记录 2. 斜面接种法 ① ② 纯培养(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌) 菌种保存 结果观察: 细菌是否长满整个斜面，观察菌苔的颜色、透明度、表面特征等 3. 穿刺接种法 动力观察（金黄色葡萄球菌、枯草杆菌） 菌种保存 结果观察： 阳性：呈云雾状（有动力） 阴性：穿刺线边界清晰并变粗（无动力） 4. 液体接种法 增菌（枯草杆菌、大肠埃希菌） 生化反应 结果观察 表面生长 沉淀生长 均匀浑浊 对照 三、细菌的生化反应(实验7) 1. 糖发酵试验 2. IMViC 试验 靛基质产生试验（吲哚试验） 甲基红试验 V-P试验 枸橼酸盐利用试验 3. 硫化氢产生试验 原理 细菌含有不同的酶，分解糖的能力不同 大肠杆菌：能发酵葡萄糖和乳糖 痢疾杆菌：只发酵葡萄糖 作用结果：产酸、产气 大肠杆菌：发酵葡萄糖（甲酸脱氢酶）→生成甲酸→进一步分解为CO2和H2（产酸+产气） 痢疾杆菌：（缺乏该酶）发酵葡萄糖→产酸（不产气） 1. 糖发酵试验 观察 产酸：指示剂来指示 溴甲酚紫【pH5(黄)－pH7(紫)】 产气：糖发酵管中倒置的杜氏小管中是否有气泡 结果 “－”：细菌不分解糖(紫色) “＋”：细菌分解糖产酸(黄色) “? ”：细菌分解糖产酸产气(黄色+气泡) 2. IMViC实验 I: 吲哚(indole)试验 M: 甲基红(methyl red, MR) 试验 Vi: 乙酰甲基甲醇(Voges-Proskauer, VP)试验 C: 枸橼酸盐利用(citrate utilization)试验 吲哚(靛基质)试验 色氨酸酶(细菌） 色氨酸→吲哚 →玫瑰吲哚 (蛋白胨【培养基中】) （对二甲基氨基苯甲醛） 吲哚试剂 甲基红试验(MR) 细菌分解葡萄糖的能力不同 分解葡萄糖能力强 →酸多 →pH ≤4.5 → “+” (红色) 分解葡萄糖能力弱 →酸少/进一步转化 → pH ＞4.5 → “－”(橘黄色) *指示剂: 甲基红 变色范围为 pH4.4―6.2 红色→黄色 乙酰甲基甲醇试验(VP) 细菌分解葡萄糖→丙酮酸→二乙酰＋胍基化合物【培养基中】