工业发酵菌种选育.pptx

第二章　工业发酵菌种来源及选育;（1）所需培养基易得，价格低廉； （2）培养和发酵条件温和（糖浓度、温度、pH、溶解氧、渗透压等） （3）生长速度和反应速度较快，发酵周期短 （4）单产高 （选择野生型、营养缺陷型或调节突变株） （5）抗病毒能力强 （6）菌种纯粹，不易变异退化，稳定性好 （7）菌体不是病源菌，不产生任何有害的生物活性物质和毒素（包括抗生素、激素和毒素），保证安全; 二、工业发酵微生物及其代谢产物; 2、微生物次级代谢与初级代谢的关系;三、工业上常用的微生物; 1、常用的细菌;2、酵母菌;面包酵母;3、霉菌;应用：酱油、酱类（淀粉酶）;米曲霉 应用：产糖化酶和蛋白酶、主要用于酿酒制曲和酱油制曲; 毛 霉 应用：可以产生蛋白酶，我国多用于豆腐乳、豆豉等的制作;根霉 种类：米根霉、华根霉、少根根霉、爪哇根霉 应用：酿酒;青霉菌;4、放线菌;第二节、生产菌种的选育;采样 预处理 富集培养 菌种初筛 菌种复筛 性能鉴定 菌种保藏 (P14) ; （一）采样;（二）富集培养;培养条件控制;;（四）筛 选（生产能力的考察）;（六）微生物选择性分离的原理和方法;（3）抗生素或试剂；（P32）;酪素培养基和淀粉培养基;随机分离法(生物活性物质产生菌的分离）P19-21;; 四、诱变育种;;Mutation;2、诱变剂的选择;3、诱变育种步骤;4、例子紫外线的诱变育种; 操作步骤 1）将细菌培养液以3000r／min离心5min，倾去上清液，将菌体打散加入无菌生理盐水再离心洗涤。 2）将菌悬液放入一巳灭菌的，装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动，以打散菌体。将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤，单细胞滤液装入试管内，一般处于浑浊态的细胞液含细胞数可达108个／ml左右，作为待处理菌悬液。 3）取2～4m1制备的菌液加到直径9cm培养皿内，放入一无菌磁力搅拌子，然后置磁力搅拌器上、15W紫外线下30cm处。在正式照射前，应先开紫外线10min，让紫外灯预热，然后开启皿盖正式在搅拌下照射10～50s。操作均应在红灯下进行，或用黑纸包住，避免白炽光。 4．取未照射的制备菌液和照射菌液各o.5ml??行稀释分离，计数活菌细胞数。 5．取照射菌液2ml于液体培养基中(300ml三角瓶内装30ml培养液)，120r／min振荡培养4～6h。 6．取中间培养液稀释分离、培养。 7．挑取菌落进行筛选。;亚硝基胍诱变曲霉菌;操作步骤 1．单孢子悬液制备 取斜面，加入6ml 0.1mol／L pH6.o的磷酸缓冲液，用接种环刮下孢子，振荡试管，立即通过带滤纸漏斗过滤，由此制得单孢子悬液，若孢子液浑浊状，其孢子浓度可达l06个／ml，此为待处理孢子悬液。 2．MNNG溶液的制备 用分析天平称取2mg，加入2ml 0.1mol／L pH 6.0磷酸缓冲液，于暗处振荡溶解。 3．诱变处理 吸取MNNG溶液lml，加入到1m1孢子悬液中，30℃振荡30min，立即稀释1000倍停止作用，然后以10-2，10-4两个稀释度分离培养，30℃ 3天后计数。 4．死亡率计算 将未处理的孢子液1ml加入1ml磷酸缓冲液中，同上逐级稀释分离， 30℃下培养3天。根据处理前后的活孢子数可计算出死亡率。 5．挑取菌落进行糖化酶及蛋白酶产量筛选．;五、代谢控制育种;基因重组;五、防止菌株衰退的措施;2、防止菌种衰退的方法;第三节、微生物菌种保藏;◆原理 根据菌种的生理、生化特点，创造条件使菌种的代谢活动处于不活泼状态（休眠状态）。;3、保藏机构 ? 国际重要菌种保藏机构;3、保藏机构 ? 中国一般保藏机构;4）医学微生物菌种保臧管理中心（CMCC）； 中国医学科学院皮肤病研究所，南京（ID）∶真菌。 卫生部药品生物制品检定所，北京：细菌。 中国医学科学院病毒研究所，北京：病毒。 5）抗生素菌种保藏管理中心（CACC）； 中圈医学科学院抗生素研究所，北京和四川抗生素工业研究所，成都：新抗生素菌种。 华北药厂抗生素研究所，石家庄：生产用抗生素菌种 6）兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）； 农业部兽医药品监察所，北京。 ;斜面传代法 穿刺法;把菌种接种到所需要的斜面培养基上，最适温度下培养，长出丰满的菌体细胞或孢子后，置于4℃的冰箱或冷库中保藏。然后每隔一定时间重新移接一次，传代保藏。 移种时间因菌种不同而异， 几周到几个月不等。;1938年发明。 基本方法和原理：是在斜面培养或穿刺培养上加一层液体石蜡，液体石蜡可以防止失水干燥，隔绝空气，降低菌种细胞代谢速率。此