浅谈高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量.doc

浅谈高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量 广大朋友们，关于“浅谈高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量”是由xx论文频道小编特别编辑整理的，相信对需要各式各样的论文朋友有一定的帮助! Abstract:Objective To determine the content of quercetin in Hedyotis diffusa Willd. Methods The analysis was performed on an HPLC C18 column (4.6 mm×200 mm，5 μm) at the detection wavelength of 370 nm. The mobile phase consisted of 0.2% phosphoric acid?methanol (50∶50) with a flow rate of 1 mL/min. Results The calibration curve was linear in the range of 0.08-0.32 μg of quercetin (r=0.999 6).The average recovery was 101.5% with RSD 0.8% (n=6).Conclusion The method is simple，rapid and accurate for the determination of quercetin in Hedyotis diffusa Willd, which could be used for the quality control of Hedyotis diffusa Willd. 　　Key words:Hedyotis diffusa Willd.; quercetin; HPLC 　　白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.)的干燥全草，研究表明该植物主要含有黄酮类、三萜类、蒽醌类、环烯醚苷萜类、甾醇类、烷烃类等化学成分，具有抗肝炎、抗肿瘤、抗病毒、抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多种药理活性[1]。白花蛇舌草中黄酮类化合物的含量测定未见文献报导，本文采用HPLC法测定了白花蛇舌草中槲皮素的含量，为评价白花蛇舌草的内在质量提供科学依据。 　　1 仪器与药品 　　高效液相色谱仪：P230高压恒流泵/DAD230二极管阵列检测器(大连依利特分析仪器有限公司)，Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm，5μm，大连依利特分析仪器有限公司);电子精密天平(Ohaus);KS?1500超声清洗器(宁波科胜仪器厂);高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。 　　白花蛇舌草(市售，批号2006001，2006002，2006003)，经本校药植教研室陈再兴老师鉴定均为白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.);槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号100081-200406，供含量测定用);甲醇为色谱纯;水为重蒸水。 　　2 结果与分析 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流动相：甲醇?水?磷酸(体积比50∶50∶0.2);检测波长：370 nm，流速：1 mL/min，柱温：25 ℃ ，进样量：20 μL。色谱图见图1、2。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含槲皮素10 μg的溶液，即得。 3 样品溶液的制备 　　取白花蛇舌草药材粗粉1.0 g，精密称定，置烧瓶中，精密加入50%(体积分数)甲醇20 mL和盐酸1 mL，密塞，称定重量，加热回流2 h，放冷，用50%(体积分数)甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜 (0.45 μm) 滤过，取续滤液，即得。 　　2.4 系统适用性试验 　　分别取对照品溶液、供试品溶液各20 μL进样测定，理论塔板数为15 000，供试品溶液色谱图中槲皮素峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5。 　　2.5 线性关系的考察 　　精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品10.0 mg，加甲醇定容至100 mL，分别精密量取上述对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL 置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的溶