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第十四章 高效液相色谱法 Chapter 14 High Performance Liquid Chromatography 一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（2 ） 液相色谱仪（3 ） 液相色谱仪（4 ） 二、高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 三、流程及主要部件 1.流程 2.主要部件 (1) 高压输液泵 5 ♥主要部件之一，压力：150～350 ×10 Pa 。 ♥为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10 μm ），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 ♥应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 (2)梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液 泵，将两种不同极性的 溶剂按一定的比例送入 梯度混合室，混合后进 入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过 比例调节阀,将两种或 多种不同极性的溶剂 按一定的比例抽入高 压泵中混合。 (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm 。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 (5) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8 μL ）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器 （differential refractive index detector ） 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（ 每种物质具有不同的 折光指数）； 灵敏度低、对温 度敏感、不能用于梯 度洗脱； 偏转式、反射式 和干涉型三种； 示差折光检测器 d. 荧光检测器 （fluorescence detector ） 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B 、 黄曲霉素、卟啉类化合物、 农药、药物、氨基酸、甾类 化合物等有响应； 一、 液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatography 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10 μm 的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 二、 液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatography 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相