石斛属rapd分析及鉴定铁皮石斛的特异性引物设计.pdf

第 26 卷第 7 期 　　　 中 国 中 药 杂 志 Vol . 26 ,No . 7 200 1 年 7 月 　　　　　　　　　 　　　　　　　　　 J ul . ,200 1 China Journal of Chinese Materia Medica ·研究论文 · 石斛属 RA PD 分析及鉴定铁皮石斛的 特异性引物设计 1 1 1 2 张 　铭 , 黄华荣 , 廖苏梅 , 高江云 ( 1. 浙江大学生命科学学院 ,浙江 杭州 　3 100 12 ; 2 . 中国科学院西双版纳热带植物园 ,云南 昆明 　650223) [摘要] 　目的:对石斛属植物亲缘关系进行分析 ,并设计一对能方便准确地鉴别铁皮石斛的特异性引物 。方 法 :用随机扩增多态性 DNA ( RA PD) 技术对石斛属内26 个种和金石斛属的 1 个种进行了基因组 DNA 多态性分析 , 并构建聚类树状图。根据筛选到的DNA 片段序列 ,将 Sangon 18 引物从 3 ’端延长至 20 bp ,得到所要的特异性引 物 。结果和结论 :设计成的特异性引物能方便快捷地鉴别出铁皮石斛 。此技术为药材的分子鉴定提供了一个新思 路 。 [ 关键词] 　石斛属 ;铁皮石斛 ;RA PD ;特异性引物 ( ) [ 中图分类号] R 282 . 5 　[文献标识码] B 　[文章编号] 100 15302 200 1 　　石斛属 Den d robi u m Sw . 是兰科植物中的第二 筛管 、内含物等性状来鉴别 ,但加工成品其表面性状 大属 , 全世 界约有 1 500 ～ 1 600 种 , 我 国近 80 已发生极大变化 , 同时相近种又非常相似 ,这都给鉴 种[ 1 ] ,其中 30 多种可入药[2 ] ,而铁皮石斛 Den d ro 定带来了很大的困难 。 bi u m can di d u m Wall . ex lindl . 是其中的上品 ,早在 DNA 分子标记技术的应用使中药鉴定深入到 《神农本草经》上就已把它作为传统的珍稀野生中药 分子水平 ,提高了鉴定的准确性 ,也能解决上述的一 材加以记载 。近年来 , 国内外药学研究者对其化学 些难题 。1994 年香港中文大学 Cheung 率先用 A P 和药理的深入研究还发现它具有更为重要的药用价 PCR 方法对西洋参 、人参的鉴别进行了研究[9 ] 。随 值[3 ,4 ] 。 后出现许多用 DNA 分子标记方法鉴定中药材的报 石斛的生境十分独特 ,资源稀少 ,加之人为滥采 道[ 10 ,11 ] 。但仍因其操作复杂 ,成本过高 ,难 以作为 和生境破坏 ,不少名贵品种特别是铁皮石斛已近濒 快速的常规方法应用于中药材的鉴定 。 危 。因此 , 目前石斛药材市场上出现大量假冒的铁 本文在对 26 种石斛进行 RA PD 聚类分析的基 皮石斛 。由于不同来源的石斛其药用成分如石斛 础上 ,对铁皮石斛某些特异性的 DNA 片段序列进 碱 、石斛多糖的种类和含量差异较大 ,药理活性亦不 行分析 ,从而设计出一对长度大于 15 bp 的高度特 同[5 ] 。而加工成的石斛生药仅仅依靠颜色 、形状 、 异性引物 ,该引物只能与铁皮石斛基因组的某一区 气味、味道和质地等感观特征难以区分其真伪 。为 域特异性结合 ,这就提高了鉴定的准