质粒载体介绍.docx
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质粒载体的构建.doc
质粒载体的构建
摘 要：质粒载体的构建。首先要获得目的DNA。根据其目的基因序列和启动子序列设计引物，为提高目的基因产率，采用两次PCR的方法，即第一次设计引物扩增全序列基因，第二次设计带酶切位点的引物以第一次扩增产物为模板进行扩增，进而加尾连接到T-DNA上，再利用电转化的方法将连接产物转化到带有PCAMBIA1381的DH5α感受态细胞中复制表达。
关键词： 质粒 DNA PCR 电泳 感受态 转化
引言
质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。其特点如下：
是染色质外的双链共价闭合环形DNA（
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质粒载体的概况及构建.ppt
**************质粒载体的概况及制备质粒的定义、命名1质粒的基本特性2质粒的分类3质粒载体的概况（一）质粒的定义、命名★质粒不是细菌生长所必须的★可赋予细菌抵御外界因素不利影响的能力★分子量在1~200kb之间定义：质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。质粒的定义、命名：命名：小写字母p代表质粒，两个大写字母代表发明者，后面接实验编号。质粒（plasmid）特点：能在宿主细胞内独立复制；带有某些遗传信息，会赋予宿主细胞一些遗传性状。（二）质粒的基本特性（2）不相容性质粒DNA携带有自己的复制起始区（ori）控制质粒拷贝数的基因能独
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基因克隆载体-质粒.ppt
基因克隆载体 生物与食品工程学院 载体的概念 克隆载体是一种能携带外源DNA片段进入受体细胞，并在受体细胞中得以维持或表达的DNA分子。 生物学本质：质粒、噬菌体、动植物病毒改造后的产物。 特 点：能在受体细胞内稳定存在和复制。 载体的一般特征 1. 容易进入受体细胞 2. 自主复制功能 3. 显著的筛选标记 4. 特定的多克隆位点 5. 安全性 载体的种类 1. 质粒载体 2. 噬菌体载体 3. 病毒载体 质粒 生物学本质：细胞内染色体外的遗传物质。广泛存在于细菌细胞中，也出现在某些蓝藻、绿藻、眼虫、衣藻和真菌等细胞中。 结构特征：供价闭环双链环状DNA。 分子大
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柯斯质粒载体.PPT
M13、f1和fd，是一类丝状大肠杆菌噬菌体，它们都含有长度为6.4kb、彼此具有很高同源性的单链环状DNA分子。这些丝状噬菌体表现出一系列其它载体所不具备的优越性： 有时亦称为感染性的单链 M13噬菌体颗粒的外形呈丝状，在颗粒中包装的仅是（十）链的DNA，有时亦称为感染性的单链（图5-11）。 M13噬菌体首先吸附在F性须上，其吸附的位点看来是在性须的末端（图5-12）。噬菌体的基因组从性须末端进入到细胞的内部，进入细胞内部的M13（＋）链DNA，便起到一种模板的作用，合成出互补的（一）链 DNA。由此形成的双链形式的M13DNA，称为复制型 DNA。它按θ形式进行几轮复制之后，基因
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质粒载体-基因工程.pptx
;;一、质粒（plasmid）;一、质粒（plasmid）;一、质粒（plasmid）;一、质粒（plasmid）;一、质粒（plasmid）;一、质粒（plasmid）;一、质粒（plasmid）;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;ColE1;
重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;;二、重要的质粒载体;外源基因?BamH I;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;二、重要的质粒载体;
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第六讲基因克隆的质粒载体..doc
第六讲 基因克隆的质粒载体
吴 乃 虎
中国科学院遗传与发育生物学研究所
2005年8月
基因克隆的质粒载体
一、导言
1．质粒是一类引人注目的亚细胞有机体
其结构比病毒还要简单，既无蛋白质外壳，也无细胞外生命周期，只能在寄主细胞内增殖，并随着寄主细胞的分裂而被遗传下去。
2．质粒的类型多种多样
F质粒：F因子或性质粒(Sex plasmid)，它能够使寄主染色体上的基因与F因子(F factor)一道转移到原先不存在该质粒的寄主受体细胞中去。
R质粒：通称抗药性因子(Resistant factor, R factor)，编码一种或数种抗菌素抗性基因，并能将此
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质粒的分子生物学与质粒载体试题.pdf
第四章 质粒的分子生物学与质粒载体
一、填空题
1. 基因工程中有 3 种主要类型的载体： 、 、 。
2. 由于不同构型的 DNA 插入 EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，
SC DNA 的泳动速度 ，OC DNA 泳动速度 ，L DNA 居中，通过凝
胶电泳和 EB 染色的方法可将不同构型的 DNA 分别开来。
3. 质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点开始的。然而，质
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植物质粒的提取以及载体构建.ppt
⑤载体本身的分子量都比较小，可容纳较大的外源基因片段。⑥载体在细胞内的拷贝数要高，方便外源基因在细胞内大量扩增。⑦载体在细胞内稳定性要高，保证重组体稳定传代而不易丢失。⑧载体的特征都是充分掌握的，包括它的全部核苷酸序列。第31页，课件共44页，创作于2023年2月关于植物质粒的提取以及载体构建第1页，课件共44页，创作于2023年2月一、植物DNA的提取1、目的和意义2、原理3、试剂的准备4、操作过程5、DNA检测6、注意事项7、常见问题及解决办法第2页，课件共44页，创作于2023年2月1、目的和意义:1、抗性苗的检测2、分子杂交3、分子标记4、基因扩增第3页，课件共44页，创作于2023年
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构建SUMO-HDA1-pET21a载体质粒.docx
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蛋白质是细胞生理功能的执行载体，完整翻译后的肽链还需要经过加工和修饰才能发挥功能，生物体内存在多种已知蛋白修饰方式调控各种生理以及病理过程，主要包括乙酰化/去乙酰化、甲基化/去甲基化、泛素化、磷酸化和糖基化等[1.2]。近年来组蛋白去乙酰化酶(HDAC)及HDAC抑制剂(HDACi)受到研究人员青睐，其中HDA1是最大的亚族，本课题将HDA1基因插入质粒SUMO-pET21a，先热激转入克隆菌株DH5α，单菌落培养、提取质粒并送样测序，序列比对正确，再转入表达菌株BL21内，以SUMO-HDA1-pET21a-BL21为工程菌，在LB液体培养基中孕育，经IPTG诱
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植物双元质粒载体的构建;一、背景知识;LB;一、背景知识;一、背景知识;一、背景知识;一、背景知识;一、背景知识;一、背景知识;一、背景知识;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;二、载体构建的步骤;三、载体构建的一些技巧;五、载体构建的一些技巧;五、载体构建的一些技巧;五、载体构建的一些技巧;T
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第四章第四章 基因克隆的载体基因克隆的载体
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2.1_基因工程载体-质粒载体_201209.ppt
1) 用限制性内切酶消化 DNA 样品 2)用限制性内切酶消化 质粒DNA 3) 连接样品DNA和质粒DNA的消化产物 4) 用连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 5) 涂布在琼脂平板上进行耐抗菌素筛选 五、典型的质粒克隆技术 3）连接样品DNA和质粒DNA的消化产物 冷循环器 4）用连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 转化细菌有两个基本方法。 一是 化学法，即用CaCl2 处理并加热激以促进DNA进入菌体； 二是电激法，即 施加短脉冲的电荷以促进DNA 吸收。 5）细菌在加有Amp+X-Gal的培养基上生长以进行筛选 筛选会有三种结果： 一是要插入的序列自连，结果没有菌落形成
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链霉菌克隆载体质粒载体质粒名称大小kb来源宿主范围拷贝数.ppt
* * 第四节 细菌和链霉菌的分子克隆载体 一、革兰氏阴性菌克隆载体 1. 移动载体（mobilizable vector） 1)?特点 i. 广谱宿主范围，即复制子和遗传标记具很宽适应范围 ii. DNA的转移常常需要经过中间宿主细胞和借助于辅助质粒，DNA进入中间宿主细胞可用直接转化 2)?结构 i. RK2质粒的结构 a. oriV DNA复制起点 b. DNA复制基因