绿色荧光蛋白(gfp) 的特性及其在分子生物学研究中 的应用.ppt

绿色荧光蛋白(GFP) 的特性及其在分子生物学研究中  的应用 ;生物发光现象, 在无脊椎动物中很普遍。它是生物能量的一种转换方式[ 1, 2 ]。在水母(Jellyfish) 中, 当能量从 Ca + + 活化的水母蛋白(A equo rin ) 转移到绿色荧光蛋白(Green F luo rescen t P ro tein, 简称GFP)上以后，它即发出绿色荧光。活体GFP与纯化的 GFP 具有相同光谱特性, 即吸收蓝光, 放射绿光。可以用紫外灯、荧光显微镜或荧光活化流体分光光度计进行活体检测 。由于GFP 稳定、灵敏度高、无生物毒性、荧光反应不需要任何外源反应底物及表达无物种或细胞组织的专一性, 因此它是一种独特的 报告蛋白(R epo rter p ro tein) , 可广泛用于基因的表达与调控、蛋白质的定位、转移及相互作用、信号传递、转染与转化, 以及细胞的分离与纯化等研究领域。90年代后, 有关GFP 及其利用的研究进展较快，已引起分子生物学家极大的兴趣与关注。 ;一　GFP 的结构、特性与功能;2　GFP 的光谱特性;3 GFP的稳定性;二GFP 在分子生物学研究中的应用;体观察到GFP荧光,集中在细胞质或核周围部。紫外光下液泡显蓝色荧光,蓝光下叶绿体显红色荧光,出现黄色荧光是叶绿体红色荧光与GFP绿色荧光的重叠效果。HuW也报道,用电击法和PEG法同时转化玉米和拟南芥菜(Arabidopsis)原生质体,GFP在玉米原生质体中表达,但PEG介导比电击法转化效率高,而拟南芥菜原生质体中未观察到GFP表达[33]。不过Sheen J等利用基因枪(Microprojectile bombardment)轰击拟南芥菜完整叶片和根组织,观察到活体GFP荧光。Niedz RP等用电击法转化甜橙(Citrus sinensis)原生质体,450~490 nm蓝光下观察到20%~60%原生质体发生较强绿色荧光[34]。此外,也有GFP在菸草、水稻中表达的报道。GFP在多种原核和真核生物细胞中表达,表明GFP色基形成的翻译后修饰过程并非需要原有水母(A.victoria)细胞中任何其它成份或共因子。亦表明GFP作为报告基因,其表达不受生物类型、基因型或细胞组织类型的限制,具有广泛的利用前景。;2.2 GFP作为报告蛋白用于基因表达的调控效果研究;2.3 GFP融合蛋白用于研究蛋白质定位、移动及相互作用;2.4 GFP报告蛋白用于细胞活体分离与纯化;3 GFP应用中的问题及注意事项