转绿色荧光蛋白基因的青枯雷尔氏菌生物学特性转绿色荧光蛋白基因的青枯雷尔氏菌生物学特性.pdf

中国农业科学 2008,41(11):3626-3635 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.024 转绿色荧光蛋白基因的青枯雷尔氏菌生物学特性 1,2 1 1 车建美 ，蓝江林 ，刘 波 1 2 （福建省农业科学院农业生物资源研究所，福州 350003 ； 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州 350002 ） 摘要： 【目的】采用电击法对青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum ）进行gfp/luxAB 基因双标记，研究 标记前后菌株的生长差异、以及侵染性和致病性的变化。【方法】通过电击法进行青枯雷尔氏菌的遗传转化，采 用番茄组培苗对标记菌株的侵染条件和侵染过程进行初步研究。【结果】成功地采用 gfp/luxAB 基因标记了青枯 雷尔氏菌。标记后的菌体细胞形状与亲本菌株形状相同，均为长椭圆形，近杆状，整个细胞呈现绿色荧光，PCR 结果表明，从标记青枯雷尔氏菌菌株的基因组DNA中扩增出约3.0 kb的 gfp 基因片段。标记菌在对数生长期，荧 光素酶活性快速增加，到稳定期，荧光素酶活性降低。在无选择压力条件下连续移植20次，仍然保持均匀而且强 烈的绿色荧光，荧光稳定性保持在100%。gfp 基因标记前后的菌株在培养的最适温度、最佳pH值及生长曲线上基 本一致，在番茄组培苗内的侵染路线相同，致病力均达到 90%以上。【结论】将 gfp 和 luxAB 融合基因成功转入 青枯雷尔氏菌，融合基因在标记菌株中的表达高效稳定。导入的 gfp 基因对宿主的生长特性及致病性没有影响。 关键词：青枯雷尔氏菌；电击法；gfp/luxAB 基因 GFP Tagging Ralstonia solanacearum with gfp/luxAB mini-Tn5 1,2 1 1 CHE Jian-mei , LAN Jiang-lin , LIU Bo 1 2 ( Agricultural Bioresource Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003; Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Ministry of Education, Fuzhou 350002) Abstract: 【Objective 】The Ralstonia solanacearum strain was chromosomally tagged with the marker genes gfp and luxAB by electroporation. The growth properties and the pathogenicity of the tagged strain and the wild type strain were compared in this paper. 【Method 】The R. solanacearum strain was