人源抗菌肽LL-37在毕赤酵母中的高效表达及其活性检测.pdf

微生物学通报 APR Instituteof @2008 Microbiology by Microbiology．CAS tongbao@im．ac．cn 人源抗菌肽LL．37在毕赤酵母中的 ．_-_JL_．。 Cj 同效表达及其活性检测 申艳敏1,2魏建超1尚书文1,2牛明福1周玉珍1,2周斌1曹瑞兵1陈溥言1侯继波2+ (1．南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京 210095) (2．江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014) 摘 要：根据GenBankCAA86115中的LL．37氨基酸序列，选择毕赤酵母偏好密码子，采用SOE 方法合成了人源抗菌肽LL一37基因．所合成的LL．37基因全长为141 bp，并在其N端引入kex2 裂解位点，以保证表达抗茵肽具有天然N端。基因克隆入pPICZa—A质粒，构建分泌型重组酵母 I酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株 表达载体pPICZa—A—U．37。pPICZcx．A．LL．37经Sac x．33。PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌LL．37于发酵上清液，其表达量为206 mg／L． 表达产物LL．37耐热性强，在IOOC条件下40min内抗茵活性不变，煮沸3h以上仍具有活性．琼 脂糖孔穴扩散法检测显示LL．37对多种革兰氏阴性茵和阳性菌均具有很好的抑制活性，其对金黄 色葡萄球菌Cowan E．coli)和鸡 I(Staphylococcusaureus)、致病性大肠杆菌K99(Enteropathogenic 白痢沙门氏茵(Salmonella pullorum)的最小抑菌浓度(MinimalInhibitory 1．56 ttg／mL、3．12I-tg／mL和1．56ttg／mL． 关键词：抗菌肽LL．37，基因设计，分泌表达，活性检测 oftheHumanAntibacterialLL-37 HighExpression Peptide inPichia andtheDetectionofIts pastoris Activity SHENYan．Minl，2WEIJian—Cha01SHANGShu．Wenl一NIUZHOUYu．Zhenl，2 Ming．Ful ZHOU．BinlCAO CHENPu．YanlHOUJi．B02+ Rui．Bin91 Disease and in (1．KeyLaboratoryofAnimalDiagnosis Immunology，MinistryofAgriculture