黑木耳核糖体失活蛋白基因的克隆的任务书.docx
黑木耳核糖体失活蛋白基因的克隆的任务书
任务名称:黑木耳核糖体失活蛋白基因的克隆
任务描述:
黑木耳是一种常见的食用菌,其具有良好的营养价值和药用价值。本任务旨在克隆黑木耳的核糖体失活蛋白基因,对其功能进行研究,为黑木耳的遗传改良以及生产利用提供理论基础。
任务要求:
1.设计引物对黑木耳中的目标基因进行PCR克隆;
2.提取黑木耳总RNA并反转录合成cDNA;
3.进行RT-PCR验证克隆的目标基因;
4.构建目标基因的原核表达载体,进行大量表达并纯化目标蛋白;
5.对目标蛋白进行生物学性质鉴定,分析其功能和表达特点。
预期阶段时间节点:
1.引物设计与PCR克隆:1周;
2.RNA提取及cDNA合成:2天;
3.RT-PCR验证克隆:1周;
4.目标基因的原核表达载体构建:1周;
5.目标蛋白的大量表达、纯化和功能鉴定:3周。
工作计划:
1.第1周:了解实验流程,设计引物并进行PCR反应,克隆目标基因;
2.第2周:提取黑木耳总RNA并进行反转录合成cDNA,进行RT-PCR验证克隆的目标基因;
3.第3周:构建目标基因的原核表达载体,并进行质粒测序;
4.第4周~第6周:进行大量表达并纯化目标蛋白;
5.第7周~第9周:对目标蛋白进行生物学性质鉴定,分析其功能和表达特点。
相关参考文献:
1.Chen,C.,Beaudry,R.M.(2003).TheantibacterialactivityofLentinulaedodesdiskandstalkextracts.Mycologia,95(5),967-973.
2.Liang,C.,Mao,L.,Luo,X.,Zhou,X.(2016).EffectsofthermalprocessingonantioxidantandimmunomodulatoryactivitiesofpolysaccharidesfromLentinusedodes.JournaloftheScienceofFoodandAgriculture,96(10),3426-3431.
3.Okuno,T.,Sato,T.(2001).CatalogueofgenesfoundamongcDNAsfromLentinulaedodesfruitingbody.Mushroombiologyandmushroomproducts,8,25-69.