酶联免疫吸附试验操作注意事项.ppt

产生非特异性显色的原因试剂盒因素：固相载体原料的不同和制作工艺的差别、包被物的提纯度、固相载体表面未被包被的空隙封闭不良等；人为因素：加样、洗板、温育、判断结果中的操作不当或责任心不强等造成假阳性或假阴性；标本中含有干扰物：1.内源性干扰物——包括类风湿因子(RF)、黄疸等：类风湿因子可作用于多种动物及人IgGFc段的自身抗体，多数为IgM类，能充当抗原成分与固相的酶标记抗体反应，从而呈非特异性显色；黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶，如用HRP为标记物,测定有可能产生非特异性显色。2.外源性干扰物——常常因样品采集、储存、处理不当造成的样品溶血，被细菌污染，标本凝集不全等。第30页,共35页，2024年2月25日，星期天ELISA实际操作中常见的问题和解决办法第31页,共35页，2024年2月25日，星期天第32页,共35页，2024年2月25日，星期天第33页,共35页，2024年2月25日，星期天总结严谨的设计、优质的试剂、良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。第34页,共35页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第35页,共35页，2024年2月25日，星期天**AP磷酸酯酶关于酶联免疫吸附试验操作注意事项酶免疫测定类型这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay），简称ELISA。酶免疫技术酶免疫组化酶免疫测定均相酶免疫测定非均相酶免疫测定固相酶免疫测定液相酶免疫测定第2页,共35页，2024年2月25日，星期天ELISA原理（以一步法双抗体夹心法测抗原为例）ELISA其原理为抗原抗体特异性结合和抗原抗体的酶标记，以酶催化底物显色来判断结果。第3页,共35页，2024年2月25日，星期天影响酶联免疫测定的因素较多,诸如标本的采集保存、试剂的准备、加样的技术、孵育温度的控制、洗涤反应板的方式、显色反应时间的控制等一系列问题均有可能对试验结果产生很大的影响,只有避免了这些因素,才能保证试验结果的准确性和可靠性。第4页,共35页，2024年2月25日，星期天一、移液枪的使用第5页,共35页，2024年2月25日，星期天1.样品准备（1）吸样之前要保证移液枪、枪头和液体处于相同温度。置于冰箱保存的样品应提前取出，室温放置，使温度平衡后再吸样。液体温度吸头温度的移取的液体体积会偏大液体温度吸头温度的移取的液体体积会偏小（2）若溶剂瓶中液体太少，可倒入EP管中，方便吸取。第6页,共35页，2024年2月25日，星期天2.体积设定大体积?小体积逆时针精度最佳小体积?大体积顺时针调至超过设定刻度，再回调可保证最佳的精确度严格的精确调节方法第7页,共35页，2024年2月25日，星期天3.装枪头将移液枪端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可上下敲击会引起内部的零部件因瞬间强烈撞击而松散，甚至会导致调节刻度的旋钮卡住第8页,共35页，2024年2月25日，星期天4.吸液（1）垂直吸液，枪头吸嘴尖端需浸入液面2-4mm以下。（2）枪头吸嘴预润湿（2-3次），使吸嘴内壁液体吸附达到饱和，再吸入样液，最后打出液体的体积会很精确。一般液体，正向吸液（一档?二档）。粘稠液体和易挥发液体，可反相吸液（二档?一档）。正向吸液反向吸液第9页,共35页，2024年2月25日，星期天（3）缓慢吸取，控制好弹簧的伸缩速度。吸液速度太快会产生反冲和气泡，导致移液体积不准确和腐蚀枪体。（4）吸取后将移液枪提离液面，停约一秒钟，观察是否有液滴缓慢地流出。若有流出，说明有漏气现象（原因有：枪头未上紧；枪头不匹配；移液枪内部气密性不好）。（5）吸嘴外壁残留液滴可沿壁靠去或用滤纸蘸擦。第10页,共35页，2024年2月25日，星期天5.放液（1）将吸嘴口贴到容器内壁并保持10-40°倾斜。（2）平稳地把按钮压到一档，停约一秒钟?二档，排出剩余液体。排放致密或粘稠液体时，压到一档后，再多等一两秒钟?二档。（3）压住按钮，同时提起移液器，使吸嘴贴容器壁擦过。（4）松开按钮。（5）按弹射器除去移液嘴。（6）使用完毕。第11页,共35页，2024年2月25日，星期天移液枪的养护及注意事项吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，