超氧化物歧化酶的提取技术_下_.pdf
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生意通
超氧化物歧化酶的提取技术(下)
□唐玉章
下加热数分钟其活性丧失很少 如果离
一 动物来源 的制法 ,
、 SOD
子强度很低 则即使加热至 活性损
, ,
95℃
从动物血红细胞制备 SOD 自1969 失也不多 因此 在制备过程中可采取加
。 ,
年McCond 和 Fridovich 首次从牛血红细 热的方法去除杂蛋白 常用的反应温度
。
胞中发现 以来 已建立了从动物血
,
SOD 和相应的作用时间为
、 ,
55℃ 15~30min
红细胞中提取纯化 的多种方法 其
SOD 。 、 , 、 。 为了进
60℃ 10~25min 65℃ 10~20min
基本工艺流程为 血液预处理 洗涤红细
: , 一步增强热变性的效果 也可以进行两
,
胞和溶血 去除大部分杂蛋白得 粗
; SOD 次热变性 牛血溶血液于 加热
。 75℃
品 再经柱层析分离得到精品 根据去除
; 。 冷却后离心去血红蛋白 上清液
15min , 。
杂蛋白所采用的方法不同 可以将现有
, 加 倍体积丙酮 离心 沉淀用水溶解
, , ,
15
工艺基本分为以下几种。 即得 粗品液 粗品液于 再加热
SOD 。 65℃
1.盐析法 离心后所得上清液经 层析 生
,
10min DE32
牛血红细胞溶血后 利用乙醇 氯仿
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