实验 啤酒中α-氨基酸的测定.doc

实验 啤酒中α-氨基酸的测定 一、实验目的 学习α–氨基氮含量的测定方法，控制麦汁或啤酒质量。 二、实验原理 α–氨基氮为α–氨基酸分子上的氨基氮。水合茚三酮是一种氧化剂，可使氨基酸脱羧氧化，而本身被还原成还原型水合茚三酮。还原型水合茚三酮再与末还原的水合茚三酮及氨反应，生成蓝紫色缩合物，颜色深浅与游离α–氨基氮含量成正比，可在570nm下比色测定。 三、实验器材与试剂 分光光度计，电炉等。 (1)显色剂：称取10g Na2HPO4·12H2O ，6g KH2PO4 ，0.5g水合茚三酮，0.3g果糖，用水溶解并定容至100mL（pH 6.6~6.8），棕色瓶低温保存，可用两周。 (2)碘酸钾稀释液：溶0.2g碘酸钾于60mL水中，加40mL 95％乙醇。 (3)标准甘氨酸贮备溶液：准确称取0.1072g甘氨酸，用水溶解并定容至100 mL，0℃保存。用时100倍稀释。 四、实验步骤 (1)样品稀释：适当稀释样品至含1~3μgα–氨基氮/mL（麦汁一般稀释100倍，啤酒50倍，啤酒应先除气）。 (2)测定：取9支10mL比色管，其中3支吸入2mL甘氨酸标准溶液，另3支各吸入2mL试样稀释液，剩下3支吸入2mL蒸馏水。然后各加显色剂1 mL，盖玻塞，摇匀，在沸水浴中加热l 6分钟。取出，在20℃冷水中冷却20分钟，分别加5mL碘酸钾稀释液，摇匀。在30分钟内，以水样管为空白，在570nm波长下测各管的光密度。 计算： α–氨基氮含量（μg/mL）=（样品管平均O.D./标准管平均O.D.）×2×稀释倍数 说明：式中： (样品管平均O.D./标准管平均O.D.）：表示样品管与标准管之间的α–氨基氮之比； 2：标准管的α–氨基氮浓度（μg/mL），即（0.1072×14/75）×100； 五、注意事项 (1) 必须严防任何外界痕量氨基酸的引入，所用比色管必须仔细洗涤，洗净后的手只能接触管壁外部，移液管不可用嘴吸。 (2) 测定时加入果糖作为还原性发色剂，碘酸钾稀释液的作用是使茚三酮保持氧化态，以阻止进一步发生不希望的生色反应。 (3) 深色麦汁或深色啤酒应对吸光度作校正：取2mL样品稀释液，加1mL蒸馏水和5mL碘酸钾稀释液在570n m波长下以空白做对照测吸光度，将此值从测定样品吸光度中减去。 六、思考题 1、啤酒色泽是否会对结果产生影响？ 附：分光光度计的使用：现以SP-2000UV紫外可见分光光度计为例介绍使用方法。 接通电源，预热20分钟，使仪器进入热稳定状态，仪器开始自检； 自检结束后，仪器自动停留在546nm处，并自动调100%T和0%T，当仪器显示“546”“100%T”，即进入测试状态； 按方式键（MODE），将测试方式设定为吸光度方式，仪器显示“XXXnm，X.XXXAbs” 按波长设置键至所需要波长，如570nm； 将参比溶液和被测溶液分别倒入比色杯中，插入比色槽中，盖上样品室盖； 将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整 “0Abs”； 将被测溶液推入光路中，读取显示器上的吸光度值； 搞好清洁卫生工作。 注意：比色杯贵重，应格外小心。