茶 游离氨基酸测定.doc

茶 游离氨基酸总量测定 文件类别： 作业指导书 文件编号： 撰写单位： 版 本: 第 1 版 发行日期： 机密等级: □ 机密 □ 一般 合计页数: 共 2 页 核准 审核 初审 制订 会审  名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号: 1 原理 氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。 2 仪器和用具 分析天平：感量0.0001g。分光光度仪。 3 试剂和溶液 3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液： 按《茶 茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠（3.2.1）和1/15M磷酸二氢钾（3.2.2）溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95ml和1/15M磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。 3.2 2%茚三酮溶液： 称取水合茚三酮（纯度不低于95%） 2g，加50ml水和80mg氯化亚锡（GB 638-78，分析纯），搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。 3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液： 称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水中，作为母液。准确吸取5ml母液，加水定容至50ml作为工作液（1ml含茶氨酸或谷氨酸0.1mg）。 4 操作方法 4.1取样方法 按“茶叶原料验收规范”（文件编号………… ）要求进行取样。 4.2试液制备 按《茶 茶多酚测定》中4.2.1试液制备之规定，制备试液。 4.3 测定 准确吸取试液（4.2）0.5ml，注入25ml容量瓶中，加0.5ml水，0.5mlpH 8.0缓冲液（3.1）和0.5ml 2%茚三酮溶液（3.2），在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25ml。放置10min后，用10mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。 生效日期 页 次 1/2 页 序 A 表号:R-0110-002-1A 名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号: 4.4氨基酸定量标准曲线的制作 分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml氨基酸工作液（3.3）于一组25ml容量瓶中，各加水至4ml、茚三酮溶液（3.2）0.5ml和缓冲液（3.1）2ml，在沸水浴中加热15min，冷却后加水定容至25ml，按4.3的操作测定吸光度（A）。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。 参考标准曲线：C=0.1686*A+0.0381 5 结果计算 5.1 计算方法和公式 茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算： 式中： B —— 试样液总质量，g； L —— 测定用试样量，ml； M —— 试样量，g； C —— 根据4.3测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸的mg数； 1.002 —— 试样液比重（经验值）； m —— 试样干物质含量百分率，%。 5.2 重复性 同一样品进行两次测定，取两次测定的算术平均值作为结果。测定值之差，不得超过平均值的5%。 备注：本方法参考GB 8314《茶 游离氨基酸总量的测定》。 生效日期 页 次 2/2 页 序 A 表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸