液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中氯霉素残留.doc

液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中氯霉素残留 化学分析计量2011年,第2O卷,第2期 同位素内标一液相色谱一串联质谱法测定动物源性 食品中氯霉素残留 陈君义孙慧宇舒永兰王云飞. (1.张家港出入境检验检疫局,张家港215600;2.徐州出入境检验检疫局,徐州221006) 摘要加入氯霉素同位素内标的动物源性样品(龙虾,肠衣)经乙酸乙酯提取浓缩,正己烷去脂后.采用液一液 萃取,水相经0.45txm滤膜过滤后,用液相色谱一串联质谱定量.在0.1,0.2.0.3ixg/kg3个浓度水平上进行添加回 收试验,回收率为71.8%～90.O%,检出限为0.05g/kg.该法简化了前处理操作步骤,缩短了检测时间,降低了分 析成本,并保证了分析结果的准确性. 关键词同位素内标液相色谱一串联质谱动物源性食品氯霉素 氯霉素(chloramphenicol,CAP)属广谱抗生素, 曾作为动物临床常用的抗生素用于预防和治疗动物 因细菌,立克氏体引起的炎症和疾病.但由于氯霉 素具有抑制造血机能等毒副作用,还可引起不同的 个体反应,如肝损伤,视神经炎,白血病等,因此目前 许多国家严格禁止将氯霉素用于食用动物,规定其 最高残留限量为0～0.01mg/kg.随着科学技术的 进步,国外对进口动物源性产品中氯霉素的检出限 量不断降低,欧盟的最低执行限量值为0.3 Ixg/kg….有的国家甚至禁止对中国的某些动物源 产品的进口,这对我国的出口贸易造成了严重影响, 因此动物源性产品中氯霉素的残留检测变得尤为重 要. 目前有关氯霉素在食品中的残留量分析方法主 要有酶联免疫(ELISA)法,气相色谱(GC)法, 气相色谱质谱联用(GC/MS)法J,液相色谱 (HPLC)法和液相色谱一串联质谱(LC—MS/ MS)法等.ELISA法主要用于快速筛选检测, 但定性和定量均不够准确;GC和GC/MS存在检出 限难以达到要求,背景干扰较大或样品净化不完全 以及衍生化难等问题;HPLC分析较准确且过程相 对较简便,因而应用较多,但随着LC—MS/MS技术 发展的日趋成熟,该方法被越来越多地应用于测定 和确证动物源产品中氯霉素的痕量残留.以待测物 的同位素标记物作为内标,补偿前处理过程和定量 过程中的偏差,可以解决LC分析过程中的基质效 应和处理过程中提取效率的问题¨. 笔者在动物源性样品中加入氘代氯霉素作为内 标,经乙酸乙酯提取,正己烷去脂后,无需过净化小 柱,直接用LC—MS/MS测定动物源性产品中氯霉 素残留量.该法操作简便,分析时间短,定性和定量 的准确性高,满足进出口食品的兽药残留监控要求. 1实验部分 1.1主要仪器与试剂 液相色谱串联质谱仪(LC—MS/MS):API4000 型,美国AB公司; 甲醇:HPLC级; 乙酸乙酯,正己烷:优级纯,国药集团; 氯霉素标准品(CAP):纯度为98.5%,德国Dr. E公司; 氯霉素一d标准品(CAP—d):纯度为98.6%, 德国Witega公司;用色谱级甲醇配制成1000g/L 的标准储备液,贮存在4~C冰箱中,实验中根据需要 用甲醇稀释至适当浓度的标准工作液. 实验用水为去离子水. 1.2样品制备 在龙虾样品中取出有代表性的样品约500g,取 可食部分用粉碎机绞碎;从所取肠衣样品中取出有 代表性样品约300g,用剪刀剪碎(小于0.5cm). 将粉碎的样品混合均匀,均分成两份,分别装入洁净 容器作为待测样,密封,在一18℃条件下保存. 1.3样品前处理 (1)龙虾:称取5g样品(精确到0.01g)置于 50mL具塞离心管中,准确加入200L氯霉素一d 内标溶液(10ng/mL),加入20mL乙酸乙酯,高速 均质2min,超声10min,然后以3500r/min离心5 min,收集上清液,于45℃下旋转蒸发至近干,然后 依次加入4mL正己烷和5.0mL水溶解,并转移至 10mL试管中.振荡1min后离心,弃去有机相,取 1mL水相经0.45m滤膜过滤后上机测定. 收稿日期:2011—01-25 陈君义,等:同位素内标一液相色谱一串联质谱法测定动物源性食品中氯霉素残留47 (2)肠衣:称取5g样品(精确到0.O1g)置于 50mL具塞离心管中,准确加入200L氯霉素一d 内标溶液(10nmL),加入20mL乙酸乙酯,于涡 旋混合器上混匀1min,超声波超声20min,然后以 3500r/min离心5min,收集上清液,并按上述方法 操作. 1.4液相色谱与质谱条件 色谱柱:AgilentEclipseXDB—c18柱(150mm× 4.6mm,5m);柱温:25oC;流速:0.5mL/min;进样 量:25ILL;流动相:A相为甲醇,B相为水. 梯度洗脱程序:0～2rain,A相保持30%;2.0～ 3.5rain,A相从