反相高效液相色谱法测定果品中有机酸.doc

反相高效液相色谱法测定果品中有机酸 WWW.SFNCC.ORG.CN　?　2008-7-18　国家食物与营养咨询委员会 庞新安1，2，万? 英1，2（1新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室，阿拉尔? 843300;2塔里木大学生物技术研究开发中心，阿拉尔? 843300） 摘? 要：采用反相高效液相色谱法同时测定5种有机酸，有机酸浓度在5～500μg／L时，其峰面积和有机酸浓度的线性相关系数均在0.999以上，用此法测定了新疆地产四种特色果品中有机酸的含量，取得了满意的结果。关键词：反相高效液相色谱法；有机酸；果品 有机酸是果品中主要风味物质之一，直接影响果品风味、口感及色泽，是果品成熟度、耐储藏性以及加工性的重要依据，其种类和含量与果品品质有密切关系，因此在果品品质鉴定中占有重要地位［1］。目前，果品中主要以总有机酸含量即可滴定酸度作为有机酸评价指标，不能具体反映出有机酸的种类及其含量；薄层色谱法虽可测定多种有机酸，但测量精度差，不适合定量；气相色谱法需要衍生化，步骤繁琐，并影响分析结果［2］；高效液相色谱法是近几年来发展较快的方法，广泛用于各种食品和天然产物中有机酸的测定［3-11］。本文采用反相高效液相色谱法直接测定巴旦杏、无花果、沙枣、石榴中有机酸种类及其含量，同时分析4种地产干鲜果品中各有机酸含量之间的关系，以期建立适合于新疆地产果品中有机酸的检测方法，并对新疆地产巴旦杏、无花果、沙枣、石榴中有机酸营养进行综合评价，从而为深层次地开发利用4种地产干鲜果品提供科学依据。1? 材料与方法1.1? 仪器与试剂Waters-2695高效液相色谱仪，配2487紫外检测器，配Empower色谱工作站（美国Waters公司）；FW-100型高速万能粉碎机（北京市永光明医疗仪器厂）；VIC-412型Sartorius电子天平 （北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DHG-9101—2SA型电热恒温鼓风干燥箱（扬州鸿都电子有限公司）；SK5200H型超声波洗涤器（上海科导超声仪器有限公司）；T18型匀浆分散器 （IKA公司）；旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；pH211型酸度计（意大利HANNA公司）。酒石酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸（均为色谱纯）；磷酸氢二铵、磷酸、无水乙醇（均为AR）；巴旦杏、无花果、沙枣、石榴样品采自新疆特色果品种植基地。1.2? 色谱条件色谱柱：SinoChrom ODS-BP分析柱（4.6mm×250mm，5μm，大连依利特科学仪器有限公司）；流速：1.0ml／min；柱温：37℃；检测波长：210nm；进样量：20μl；流动相：磷酸氢二铵缓冲溶液，浓度为0.01mol／L，pH=2.88。1.3? 样品处理精确称取预先处理好的巴旦杏、无花果、沙枣、石榴样品，其中巴旦杏、无花果、沙枣为干样，石榴为鲜样；按照样品制备程序将其放入干燥洁净的烧杯中，加入80％乙醇溶液 50ml于常温下匀浆提取5min；取出匀浆液过滤并多次用80％乙醇溶液冲洗沉淀，合并滤液混匀定容至100ml容量瓶中，于旋转蒸发仪75℃蒸干后，用流动相溶解稀释后定容到一定体积，过0.22μm滤膜后进行HPLC测定。2? 结果与分析2.1? 有机酸标样工作曲线将有机酸标准液配制成浓度分别为5、10、50、100、300、500μg／L的溶液，每一标准液取20μ1依上法进行测定，以有机酸溶液浓度（C，μg／L）为横坐标（x）、峰面积／内标面积（A，μv.s）为纵坐标（Y）绘制有机酸的标准工作曲线，并利用峰面积与浓度进行线性回归。同时，按照上述色谱操作条件对浓度为300μg／L有机酸标准溶液平行测定5次以进行精密度试验，计算相对标准偏差，并以3倍噪声（S／N=3）计算检出限。5种有机酸标准品的保留时间、回归方程、相关系数、相对标准偏差、最小检测限见表1。结果表明，在一定浓度范围内，各种有机酸的出峰时间较为稳定而且互不干扰，内标峰面积与有机酸浓度线性关系良好，其相关系数为0.9998～9999，可以作为定量分析依据。同时，5种有机酸标准品的相对标准偏差均小于2％，表明分析仪器具有较好的精密度，紫外检测器的最小检测限为0.13～10.967μg／L，符合国家标准要求。表1? 有机酸标准工作曲线序?有机?保留时?回归?相关?相对标准?检出限?序?有机?保留时间?回归?相关?相对标准?检出限号?酸?间（min）?方程?系数?偏差（%）?（μg/L）?号?酸?（min）?方程?系数?偏差（%）?（μg/L）?1?酒石酸?3.359?A=2140C+4690?0.999803?1.318?4.383?4?柠檬酸?8.820?A=1430C-2280?0.999989?0.272?3.189?