22土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-导学案.doc

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 班级 姓名 一、【学习目标】 1.说出培养基对微生物的选择作用实验室中微生物筛选原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或 其他微生物生长。 选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 ①从物理性质看此培养基属于哪类？ ②此培养基中作为碳源、氮源的物质分别是什么？ (这种培养基对微生物是否有选择作用？如果有，是如何进行选择的？ ㈡、统计菌落数目： 测定微生物的常用方法有两种： 、 显微镜直接计数法。 前者常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 ，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。2．当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。3．设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。 1】显微镜直接计数 将待测样品与等量的已知红细胞含量的血液混匀后，涂布在载玻片上，经固定染色后，在显微镜下随机选取若干个视野进行计数，得出细菌与红细胞的比例，再根据红细胞的含量计算出单位体积内的细菌数目。也可以用血球计数板直接统计细菌含量。 2.【合作探究】—小组讨论，得出一致结论，并展示小组讨论成果！ 【思考1】、筛选菌株的培养基 KH2PO4 NaHPO4 MgSO4 H2O 葡萄糖 尿素琼脂 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 1.【基础知识】（记忆） 关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下： ．取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。 2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基 将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3．微生物的与观察 将0g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。 挑选选择培养基中不2-lO的颜色反应。 4．细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 高质量按时完成作业测评 【课后反思】 1 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 。 只有产生脲酶的细菌才能利用 作为氮源而生存。