土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数.ppt

微生物的培养与应用筛选分离分解尿素的细菌实验方法:选择培养人为提供有利于目的微生物生长的条件(包括营养物质、温度、PH值等),同时抑制其它微生物的生长.即微生物的选择培养。选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其它微生物生长的培养基.（2）实验原理加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加含碳有机物的培养基:分离自养微生物加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不含碳、氮源的培养基：分离自养固氮微生物改变某种条件:如温度、PH值等(3)培养基成分分析在该培养基的配方中，葡萄糖是C源也是能源;尿素是培养基中的惟一氮源.因此，原则上该培养基只有能够利用尿素的微生物才能够生长。具有选择作用,能够将利用尿素的微生物选择出来分析微生物生长量的测定方法：注意：接种一种微生物，在液体培养基培养，定期取样计数。1、直接计数法:参见必修301当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。理论依据：2、间接计数法:是根据微生物在培养基上所形成的菌落数来推测样品液中活细菌的数目。02说明：1）间接计数中，恰当的稀释度是成功统计的菌落数目的关键（参见实验设计部分）；2）间接计数统计的菌落数往往比活细菌数目低。（2）操作：1)设置重复组:增强实验的说服力与准确性（至少2个平板);2)选择菌落数在30-300的平板计数。（3）计算公式：每亳升样品中的菌株数=CV×MC表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)M代表稀释倍数想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？010102答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。02思考题A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有三种。一是由于土样不同；二是由于培养基污染或操作失误;三是实验组太少，缺乏可重复性。（三）设置对照对照实验是指除了被测条件(实验变量或自变量),其它条件(无关变量)完全相同的实验.分为:空白对照、条件对照、相互对照和标准对照等.01将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染(做四个平板)。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。另一种方案(空白对照)：02可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验,增加实验组数(每同学做四个平板)，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。一种方案(相互对照)：实验方案有两种实验的具体操作步骤如下:土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装（事先要灭菌）入准备好的信封中。土壤中某样品细菌的分离与计数010302四、实验案例准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基。制备培养基?将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为250mL），充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。微生物的培养与观察?将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应。为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？01答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为