土壤中分解尿素的细菌的分离与计数47页.ppt

实验操作 （5）细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 结果分析与评价 1、培养物中是否有杂菌污染 对照的培养皿中无菌落生长，说明培养基未被杂菌污染。反之，则被杂菌污染。 结果分析与评价 2、选择培养基是否筛选出菌落 牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 结果分析与评价 3、样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。 结果分析与评价 4、重复组的结果是否一致 如果不同同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要分析产生差异的原因。 二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 ◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 [三]样品的稀释 ㈣.取样涂布 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ㈣.取样涂布 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 103、104、105 放线菌 102、103、104 真菌 保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 104、105、106 细菌 目的 稀释倍数 原因：不同微生物在土壤中含量不同 ㈤.微生物的培养与观察 思考：要将哪些培养皿进行培养？ ㈤.微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 微生物的培养与观察 三.结果分析与评价 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。 四、操作提示 无菌操作 做好标记 规划时间 五.课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 本课题知识小结: 六、例题解析 　　在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是 　　A．调整期 　B．对数期 　　C．稳定期 D．衰亡期 C 1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ 　） A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的是（ 　） A.培养细菌　　 B.培养真菌　　 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素 实践训练 A C D 4.下列说法不正确的是（ 　） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计