食品中铁的测定(邻菲罗啉比色法)实验报告.doc

食品中铁的测定（邻菲罗啉比色法） 1 目的 熟练掌握直接灰化法的原理，操作及注意事项。以铁的测定为代表，掌握灰化法作为矿物质测定的前处理方法的应用；掌握消化法的原理，操作及注意事项。以铁的测定为代表，掌握消化法作为矿物质测定的前处理方法的应用；掌握邻菲罗啉比色法测铁的原理、操作及注意事项。 2 原理 2.1 灰化 食品经高温灼烧至恒重，残留物称重称为灰分； 2.2 消化 样品与浓硫酸和催化剂一同加热，可使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化成二氧化碳和水逸出，食品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵； 2.3 比色法测铁 样品经灰化(或消化)，用抗坏血酸将三价铁还原为二价铁，二价铁与邻菲罗啉反应生成红色络合物，在520nm下测其光吸收强度A，根据A值在标准曲线上查对应二价铁浓度得C样，再计算样品中铁的含量。 3 试剂 硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、邻菲罗啉、铁标准溶液（C=10ug/mL）。 4 仪器 4.1 灰化：瓷坩埚、灰化炉、干燥器、精密天平； 4.2 消化：定氮瓶、铁架台、电炉； 4.3 比色法测铁：水浴锅、可见光分光光度计、25mL比色管。 5 样品 学生营养奶粉 6 操作方法 6.1 样品的灰化处理及样品中灰分的测定 6.1.1恒重处理 取大小适宜的两个瓷坩埚（标号1、2）置于高温炉中，在600℃下灼烧0.5h， 冷却至200℃以下后，取出，放入干燥器中冷却置室温，精密称量，并重复灼烧至恒重。 6.1.2 样品称量 分别向1、2号瓷坩埚中加入奶粉5.0001g和5.0000g后，精密称量。 6.1.3 预灰化 把两个坩埚置于电炉上，半盖坩埚盖，以小火加热至样品充分炭化无黑烟产生，取下坩埚，各加入两滴HNO3溶液。 6.1.4 正式灰化 炭化后，把两个坩埚放置在600℃高温炉中灼烧至无炭粒，打开炉门，将坩埚移至炉口处冷却至200℃左右，放入干燥器中冷却至室温，称量。重复灼烧至前后两次称量之差不超过0.5mg为恒重。 6.1.5制备灰化液 分别向1、2号坩埚中加入盐酸2mL溶解，并移入100mL容量瓶中，用少量水洗坩埚，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀，制成1、2号灰化液备用。 6.1.6 制备空白液 向100mL容量瓶中加入2mL盐酸，以水定容至刻度。 6.2 样品的消化处理 6.2.1 制备消化液 称取5.1300g奶粉移入干燥的100mL定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，2g硫酸钾及20mL浓硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜放于加有石棉网的电炉上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全消失后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，在继续加热0.5h.取下放冷，慢慢加入20mL水。放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀，制成消化液备用。 6.2.2 制备空白液 向100mL容量瓶中加入20mL蒸馏水，以水定容至刻度。 6.3 比色法测铁 6.3.1 铁标准曲线的绘制 分别吸取铁标准溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml放入比色管中，加入1ml 抗坏血酸和2ml邻菲罗啉，并定容至25mL，混匀，然后60℃水浴下加热15min后，冷却。 以“0”管溶液为参比溶液，在520nm下测各管A值并绘制曲线。 6.3.2 灰化液中铁含量的测定 分别从1、2号各吸取3个10.00mL灰化液和1个10.00mL空白液于比色管中，加入1mL抗坏血酸和2mL邻菲罗啉，并定容至25mL，混匀，然后60℃水浴下加热15min后，冷却。 参比溶液：吸取10.00mL灰化液于比色管中，加入1mL抗坏血酸，不加邻菲罗啉，并定容至25mL，混匀，然后60℃水浴下加热15min后，冷却。 将比色管中的有色溶液依次注入比色皿中，在520nm下测各管的吸光度。1号记为：A灰1 A灰2 A灰3 A灰空；2号记为A灰1′ A灰2′ A灰3′ A灰空′。 6.3.3 消化液中铁含量的测定 吸取3个10.00mL消化液及1个10.00mL空白液于比色管中，加入1mL抗坏血酸和2mL邻菲罗啉，并定容至25mL，混匀，然后60℃水浴下加热15min后，冷却。 参比溶液：吸取10.00mL消化液于比色管中，加入1mL抗坏血酸，不加邻菲罗啉，并定容至25mL，混匀，然后60℃水浴下加热15min后，冷却。 将各比色管中的有色溶液依次注入比色皿中，在520nm下测各管溶液的吸光度值A消1 A消2 A消3 A消空。 7 数据整理 7.1 样品中灰分的测定 表1-灰化样品及坩埚质量 m样（g） m坩埚恒重前(g)