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ICS 65. 120 B 46 百目 中华人民共和 国 国彖标准 GB/T 28642—2012 饲料中沙门氏菌的快速检测方法 聚合酶链式反应(PCR)法 Rapid determination of Salmonella spp. in animal feeding stuffs — PCR method 2012-07-31 发布 2012-11-01 实施 GB/T 28642—2012 -XX- -J— 刖 a 本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。 本标准起草单位:农业部饲料质量及畜产品安全监督检验测试中心(沈阳)。 本标准主要起草人：张秀芹、张建勋、杜柏林、李欣南、杨希国、马俊驰、陈晓月。 GB/T 28642—2012 饲料中沙门氏菌的快速检测方法 聚合酶链式反应(PCR)法 1范围 本标准规定了饲料中沙门氏菌的快速检测的PCR方法。 本标准适用于饲料中沙门氏菌的定性筛选。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 13091饲料中沙门氏菌的检测方法 GB/T 14699. 1 饲料采样 GB 19489实验室生物安全通用要求 SN/T 1193基因检验实验室技术要求 SN/T 1870食品中致病菌检测方法实时PCR法 3原理 利用沸水浴使菌体细胞破裂，释放基因组DNA,离心使细胞壁等有形物沉淀，以上清液为模板进行 扩增,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。 4试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，试验用水符合GB/T 6682的要求。 4. 1沙门氏菌检测用引物(对)序列为： Sal F：5-TCG CAC CGT CAA AGG AAC CGT AAA GC-3 Sal R：5-GCA TTA TCG ATC AGT ACC AGC CGT CT-3 4. 2 Premix Tag 缓冲液(2 X )：内含 Tag DNA 聚合酶 1. 25 U/25 “L, 4 mmol Mg21 , dNTP 各0. 4 mmol0 4.3琼脂糖：电泳级。 4. 4 Marker 2000 0 4.5缓冲蛋白豚水(BPW)：见A. 1。 4. 6大豆蛋白豚肉汤(RVS)：见A. 20 4.7亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)：见A.3o 4.8 10倍上样缓冲液(10Xloading buffer) ：0. 05%的漠酚蓝，50%丙三醇溶液，1%的SDS。 4.9质控菌株:沙门氏菌阳性标准菌株。 4. 10 50XTAE 缓冲液：见 A. 4。 1 GB/T 28642—2012 4. 11 1XTAE 缓冲液：见 A. 5O 4. 12 漠化乙锭(5 mg/mL)：见 A. 6。 注 ：4. 2和4. 8缓冲液为商品化成品 。以上用于PCR反应及电泳试验的试剂可用功能相当的其他产品替代。 5仪器设备 5. 1 PCR 仪。 5.2恒温水浴锅