培训课件--第五章 灭菌已.ppt

* 发酵培养基灭菌后应取无菌样，以后每隔8小时取无菌样一次，直至放罐。无菌试验的肉汤和双碟应保存并观察至本罐批放罐后12小时，确认为无杂菌污染后方可弃去。无菌检查时间应每6小时观察一次无菌试验样品，以便能及早发现染菌。 关于取样及处理 * 2．染菌率的统计 总染菌率：指一年内发酵染菌的批次与总投料批次数之比乘以100﹪得到的百分率 设备染菌率：统计发酵罐或其他设备的染菌率，有利于查找因设备缺陷而造成的染菌原因 不同品种发酵的染菌率：统计不同品种发酵的染菌率，有助于查找不同品种发酵染菌的原因 不同发酵阶段的染菌率：将整个发酵周期分成前期、中期和后期三个阶段，分别统计其染菌率。有助于查找染菌的原因。 季节染菌率：统计不同季节的染菌率，可以采取相应的措施制服染菌。 操作染菌率：统计操作工的染菌率，一方面可以分析染菌原因，另一方面可以考核操作工的灭菌操作技术水平。 * 二.染菌处理(包括染噬菌体) （一）污染杂菌的处理 1．种子罐染菌的处理 种子罐染菌后都不能往下道工序移种，要及时用高压蒸汽直接灭菌后放下水。 * 加适量杀菌剂，抑杂菌生长；如某些抗生素； 降培养温度或控补料量来控制杂菌的生长速度； 上述两种措施仍不见效，就要考虑提前放罐。 前期染菌 对产生菌的危害性大，采用蒸汽灭菌后放掉； 危害性不大，重新灭菌、重新接种处理； 杂菌少且生长缓慢，可继续运转，时刻注意杂菌 数量和代谢变化。 2．发酵罐染菌的处理 中后期染菌 * 3．染菌后的设备处理 染菌后的罐体用甲醛等化学物质处理，再用蒸汽灭菌(包括各种附属设备)。在再次投料之前，要彻底清洗罐体、附件，同时进行严密程度检查，以防渗漏。 * 发酵液突然转稀，泡沫增多 早期镜检菌体染色不匀，然后菌自溶，最后仅见菌丝断片 平皿培养出现典型的噬菌斑 溶氧浓度回升提前 营养成分很少消耗 产物合成停止等 （二）污染噬菌体的处理 现 象 ①发酵液用高压蒸汽灭菌后放掉，严防发酵液任意流失； ②停产，对环境进行全面的清洗和消毒，断绝噬菌体寄生基础； ③更换生产菌种，不断筛选抗噬菌体菌种，防止噬菌体的重复 污染。 处理： * 第五节 制服染菌的要点 一、染菌原因的分析 （一）从染菌的规模和时间分析 如果是种子罐和发酵罐同时大面积染菌，杂菌的主要来源可能是空气净化系统，其次考虑种子制备工序。 如果只是发酵罐大面积染菌，除考虑空气净化系统带菌外，还要重点考查接种管道、补料系统。发酵培养基采用连续灭菌工艺时，还要严格检查连消系统是否带入杂菌。 * 如果是部分发酵罐在发酵早期染菌，可能是培养基灭菌不彻底，或种子罐带菌，或接种管道灭菌不彻底造成的。 如果是发酵的中后期染菌，重点分析补料系统和加消沫剂系统。 个别发酵罐连续染菌，就从单个罐体查找杂菌来源，如罐内是否有“死角”或冷却系统有渗漏。当然还要检查附件。个别罐批的散在性染菌，其原因很难追查，要具体情况具体分析。 * 一、染菌原因的分析 （二）从杂菌类型分析 发酵过程染菌，多种菌型出现的机率多，单菌型机率较少。 染的是耐热芽孢杆菌时，这与培养基灭菌不彻底或设备内部有“死角”关系甚大，空气中也存在芽孢杆菌。 污染的杂菌是不耐热的球菌或杆菌时，可从空气净化系统和冷却系统进行追查。 * 二、制服染菌的要点（参考P97） 1.对空气净化系统的要求 2.对蒸汽的要求 3.对设备的要求 4.对工艺操作的要求 * 本章思考题 灭菌：致死温度：致死时间：热阻：分批灭菌：连续灭菌：总染菌率： 湿热灭菌原理？ 分批灭菌和连续灭菌工艺的特点有哪些？ 深层介质过滤的原理？ 简述空气过滤除菌的工艺流程 发酵工业生产中杂菌的检查方法有哪些？ 种子罐染菌的处理方法？ * 旋风分离器工作原理。 丝网除沫器工作原理？ 发酵罐染菌的处理方法？ 发酵过程中污染噬菌体后，一般做哪些处理？ 发酵用无菌空气的质量标准。 化学物质灭菌的原理？为什么它不适合培养基的灭菌？ 熟悉对数残留定律。 * 画出由连消塔、维持罐和冷却器组成的培养基连续灭菌的流程图，并注明各个设备的名称。（5个设备每个名称0.5分，流程连线正确1分，图形规范0.5分） 连消工艺流程中，物料中的杂菌主要在哪个设备中被灭活　　　 A. 连消塔　B. 维持罐　C.　喷淋冷却器　D.　喷射加热器 * 空气深层介质过滤除菌的几种作用机理的相互关系是怎么样的？哪一种机理起主要作用呢？ 好气性发酵需要无菌空气，概括起来无菌空气在发酵生产中的作用是 。 A. 给培养微生物提供氧气 B. 也能起一定的搅拌作用，促进菌体在培养基中不断混合，加快生长繁殖速度 C. 打碎泡沫，防止逃液 D. 保持发酵过程的正压操作 棉花活性炭空气过滤器中所用的棉花为灭菌的脱脂棉？ 高温瞬时灭菌对营养成份保存较