蛋白质的测定方法K9860凯氏定氮仪.doc

粗蛋白的测定（K9860凯氏定氮仪） 一、实验目的：掌握常见饲料原料、饲料及样品中粗蛋白的测定方法。 二、实验原理：各种饲料的有机物质在还原性催化剂（如硫酸铜、硫酸钾、硫酸钠或硒粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮都转变成NH4+并与浓硫酸化合成硫酸铵，而非含氮物质，则以CO2、H2O、SO2状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出铵态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红-溴甲酚绿混合作指示剂，用HCl标准溶液（0.1 mol/l）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25计算），即为粗蛋白的含量。 三、K9860凯氏定氮仪实验试剂： 1. 硼酸溶液（20 g/L）：称取20 g硼酸，加水稀释至1000 mL； 2. NaOH溶液（400 g/L）：称取400 g NaOH，加水溶解，稀释至1000 mL； 注：NaOH溶于水大量放热，将大烧杯放入水中冷却 配置时必须使用塑料烧杯，严禁使用玻璃制品配制NaOH溶液。 3. HCl标准滴定液（0.1 mol/L）：移取8.3 mL盐酸，定容至1000 mL；(浓度很重要，一定要搞准) 4. 指示剂： 称取0.1 g甲基红和0.5 g 溴甲酚绿，用无水乙醇定容至100 mL； 5. 催化剂：将CuSO4和K2SO4按照1:10比例混合，研磨均匀（3.3 g）； 6. 硼酸溶液：在1000 mL 2%的硼酸溶液中加入10 mL指示剂； 7. H2O：必须是蒸馏水，至容积的3/4处。???? 8.硫酸铵（GB?1396）：分析纯，干燥。 四、K9860凯氏定氮仪操作步骤： 1.试样的消化（每个样品三个平行） 消化管洗净，烘干。称取试样0.2～0.5g准确至0.0002g，用长纸条送入消化瓶底部，同样加入0.3g硫酸铜，3g硫酸钾，与试样混合均匀，再加入10mL浓硫酸和4粒玻璃珠，将消化瓶放在消化炉上（约420℃）（在509通风橱内）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少3h。 以下实验操作为K9860凯氏定氮仪操作步骤（不会的可以问龙萌或者李阳） 1 检查仪器 1.1检查瓶盖是否旋紧，必须确认不漏气、不漏液； 1.2检查进出水、排液管道是否通畅； 1.3在整个测试过程中，若仪器出现异常，应立即暂停操作。 2 开机 开机前必须先打开冷凝水开关，然后打开电源开关。 3调试 开机后的界面上会显示“调试、测试、查询”字样，光标默认在“调试”，按“确定”键进入“调试”状态。 3.1 按“选择”键选中“滴定”，然后“确定”，让机器吸滴定用的盐酸润洗管道及排除其中的空气（非常重要），约需45-50秒，然后选择“排液”，重复2-3次。注意观察吸收瓶里的加入量（下拉把手即可看见）。 3.2 按“选择”键中“硼酸”，让机器吸硼酸润洗管道，约需3-4秒，然后选择“排液”，重复2-3次。注意观察吸收瓶里的接入量（下拉把手即可看见）。 注意：盐酸用量较少，硼酸可多用点，先盐酸后硼酸。 4 检测 选择“测试”（或者从菜单上面通过“选择”键，选择“测试”，然后“确定”），进入样品测试。 4.1 空白值：每次开机测一批样品，都要测系统空白值。做法如下：放上干净的空消化管，密封好。设置好参数后，选择“测试”，机器会自动进行测试。更换消化管，重复几次，待测值稳定后（盐酸变化值在0.05ml范围内较好），算出盐酸标定的平均值，即为空白值。做此空白值是为了消除系统误差。 4.2 设定参数：设定参数如下，样品重量为称量重量；滴定酸摩尔数为0.1mol/L；蛋白转换系数为6.25；空白值（设为4.1所测定的值）（空白只几乎不用改）；定标系数为系统默认。 4.3 标准值：准确称取硫酸铵0.1-0.2g,精确到0.0002g，送到空消化管底部，放在定氮仪上，测定。如果测定结果中硫酸铵的含氮量为21.19±0.2%，则可以继续测定，如果不是在此范围内，则要对盐酸的浓度进行调整，然后测定硫酸铵的含氮量，直达落在21.19±0.2%内为止。 4.4 测定：按“确认”键开始测定，机器将自动依次进行“排液、加硼酸、加碱、蒸馏、滴定、排液”过程。“滴定”结束后，系统将自动打印结果（没有打印纸，要记录在记录本上）。“排液”结束后，光标处于“继续”位置。 4.5 取下消化管，换上下一个样品，重复步骤4.2和4.3，继续测定。 5 关机（直接关闭电源即可） 5.1 关闭电源，将消化管取下，换上一根干净的空消化管，密闭好。 5.2 将机身、消化管仓、试剂仓和机器周围桌面反复擦洗，清理干净。 5.3 用洗衣粉将消化管洗涤干净，最后用蒸馏水润洗后放到60℃烘箱中烘干，收到消化管架中。注意：消化管价格昂贵，洗的时候要轻拿轻放。 五、注意事项： 5.1开机前