β-半乳糖苷酶染色试剂盒.doc

北京吉美生物技术有限公司 β-半乳糖苷酶染色试剂盒 产品简介： β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞通常体积变会大，表达pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化（aging）的一种潜在原因。本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。 Jimeiβ-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。 产品组成： 编号 名称 JD3075 100T storage 试剂(A): β-半乳糖苷酶染色固定液 100ml 4。C 试剂(B):X-Gal溶液 5ml -20。C避光 试剂(C): β-半乳糖苷酶染色液A 1ml 4。C避光 试剂(D): β-半乳糖苷酶染色液B 1ml 4。C避光 试剂(E): β-半乳糖苷酶染色液C 100ml 4。C避光 使用说明书 1份 自备材料： PBS或HBSS 细胞培养器皿 显微镜 操作步骤（仅供参考） （一）贴壁细胞染色： 对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。对于其它类型的培养液，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。 吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3min。 吸除PBS或HBSS，每孔加入1ml染色工作液。使用聚丙烯（polypropylene）容器，不能使用聚苯乙烯（polystyrene）容器配制染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。 表1：染色工作液的配制方法： β-半乳糖苷酶染色液A 10μl β-半乳糖苷酶染色液B 10μl β-半乳糖苷酶染色液C 93 0μl X-Gal溶液 50μl 说明：对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是：聚丙烯容器可以高温高压灭菌；而聚苯乙烯容器不适合高温高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。 37。C孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。注意：37。C孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入 2mlPBS，4。C可以保存数天；或者加上封片液封片后，4。C可以保存较长时间。 （二）悬浮细胞染色： 1、离心收集细胞至1.5ml离心管内，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。 2、离心，吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3 min。 3、离心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1ml染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。 4、37。C孵育过夜。注意：37。C孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。 5、取部分染色后的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，然后加入1ml PBS，4。C可以保存数天。如果离心，取细胞用于涂片，加上封片液封片后，4。C可以保存较长时间。 （三）组织切片染色： 1、对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。 2、加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以