植物DNA的提取课件.ppt

由于生物材料的差异，不可能有一种普遍适用的提纯生物体DNA的方法，植物材料有坚固的细胞壁，核酸含量较少，含有较多的多糖物质和色素、核酸酶活性高等这些因素给植物DNA的分离纯化带来了困难。 与SDS法相比 CTAB法的最大优点是能很好地去除糖类杂质，对于含糖较高的材料可优先采用。 该方法另一个特点是在提取的前期能同时得到高含量的DNA及RNA，如果后继实验对二者都需要，则可分别进行纯化，如只需要DNA则可用RNase水解掉RNA。 注意 β- 巯基乙醇有很高的毒性，吸入 、摄入或经皮肤吸收后会中毒。 中毒表现有呕吐、震颤、头痛、昏迷，甚至死亡。对眼、皮肤有强烈刺激性。可引起角膜混浊。 DNA纯化（去杂质） 蛋白质 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1）抽提。 RNA 常选用RNase消化 酚类物质 提取液中加少量巯基乙醇。 多糖 提取液中加PVP。 操作步骤 1.称取 200-300mg 叶片装入 1.5ml 离心管，置于液氮中，用研磨棒研磨至粉碎，然后向离心管中加入 1000μl 经过 65℃预热、含有 2%PVP 的 CTAB提取液和10μlβ-疏基乙醇，混匀；在 65℃下水浴 40min-1h 其间要经常颠倒混匀。 2. 加入 200μl 醋酸钾，混匀，冰浴 15min。10000rpm 离心 10min，取上清约900μl。 3、加入等体积的 Tris 饱和酚-氯仿-异戊醇（25：24：1），在摇床上充分摇动15min；10000rpm 离心10min，取上清 700μl。 4、加入 1/10 上清液体积的 Rnase，混匀；37℃水浴 40min-1h。 5、加入等体积的的氯仿-异戊醇（24：1），摇床上摇动 15min；10000rpm 离心10min，取上清约 500μl。 注意事项 1)选取新鲜材料，研磨迅速彻底，研磨好的材料应与 CTAB 抽提液充分混匀； 2)若提取产物有颜色，可能是材料中含有较多的多酚类物质，添加巯基乙醇（2－5％），尽可能选取幼嫩的材料； 去除PPT模板上的--无忧PPT整理发布的文字 首先打开PPT模板，选择视图，然后选择幻灯片母版 然后再在幻灯片母版视图中点击“无忧PPT整理发布”的文字文本框，删除，保存即可 更多PPT模板资源，请访问无忧PPT网站-- 使用时删除本备注即可 展示您的作品,PPT模板作品投稿绿色通道 :chinappt2011@ 将此幻灯片插入到演示文稿中 将此模板作为演示文稿（.ppt 文件）保存到计算机上。 打开将包含该图像幻灯片的演示文稿。 在“幻灯片”选项卡上，将插入点置于将位于该图像幻灯片之前的幻灯片之后。（确保不要选择幻灯片。插入点应位于幻灯片之间。） 在“插入”菜单上，单击“幻灯片（从文件）”。 在“幻灯片搜索器”对话框中，单击“搜索演示文稿”选项卡。 单击“浏览”，找到并选择包含该图像幻灯片的演示文稿，然后单击“打开”。 在“幻灯片（从文件）”对话框中，选择该图像幻灯片。 选中“保留源格式”复选框。如果不选中此复选框，复制的幻灯片将继承在演示文稿中位于它之前的幻灯片的设计。 单击“插入”。 单击“关闭”。 PPT模板来源于互联网,版权归原作者所有,如有问题请与站长联系 * 植物DNA的提取 基本原理 DNA提取 DNA纯化 操作步骤 注意事项 核酸的分类及存在 脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA) 与蛋白质结合在一起以 核蛋白（DNP）的形式存在。 在制备核酸时通常 破坏细胞壁及细胞膜来使 核蛋白释放出来。  核酸的理化性质 DNA为白色类似石棉样的纤维状物，RNA的纯品呈白色粉末或结晶。核酸和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一 般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶 剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。 在酸性溶液中，核酸易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。 DNA提取 SDS法 SDS是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸-蛋白复合物。在较高温度下，破坏蛋白质与DNA的结合，使DNA释放出来。SDS是有效的阴离子去垢剂，细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,SDS能够破坏这种价键。 十二烷基硫酸钠 CTAB法： CTAB：十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离。它能与核酸形成复合物。 在高盐溶液中(≥0.7mol／L NaCl