发热伴血小板减少综合征概述.ppt
高致病性病原微生物标本运输流程批准开具接收回执向原批准部门书面报告法人资质证明运输申请表包装材料报告及承诺书法人资质证明有资格实验室相关实验活动批准文件同意接收证明接收单位申请单位获得准运证书分类包装、标识联系接收单位接收人2人专车运送省级以上卫生主管部门第64页,共69页，2024年2月25日，星期天申请表病原微生物分类及名称、运输包装分类见卫生部制定的《人间传染的病原微生物名录》。申请表可从卫生部网站下载（）。申
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料第65页,共69页，2024年2月25日，星期天申
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料第66页,共69页，2024年2月25日，星期天第67页,共69页，2024年2月25日，星期天第68页,共69页，2024年2月25日，星期天*感谢大家观看第69页,共69页，2024年2月25日，星期天************1、带手套2、注意及时更换手套，尽量保持分离RNA的管子封闭。3、分离RNA保持在冰上4、使用灭菌和无RNA酶的耗材5、用0.1MNaOH，1mMEDTA（或氯仿）和无RNA酶水冲洗塑料耗材；玻璃器皿使用含去污剂的水反复冲洗，然后240℃干烤4小时，或充满0.1%DEPC的水37℃过夜（或不少于孵育12小时）。6、溶液：如果不能确认是否无RNA酶（RNase-free)，应用0.1%DEPC处理。7、分离的RNA保存于-20℃或以下冰箱，避免反复冻融，可考虑添加额外的RNA酶抑制剂。需要时再分离RNA。核酸检测的注意点：防止RNA酶污染第32页,共69页，2024年2月25日，星期天PCR交叉污染的来源与控制PCR不需无菌操作，但应十分注意交叉污染常见的污染源：以前PCR扩增产物的污染；样本处理污染；交叉污染的控制：隔离操作区：至少有三个区域，标本核酸分离、PCR反应体系配制、PCR扩增及结果分析。实验中尽量减少各区之间交叉走动，穿着不同工作服。操作技能：戴手套并及时更换、仔细操作、液体应该分装、用防气溶胶的吸头。妥善处理废弃物第33页,共69页，2024年2月25日，星期天污染的处理及时清除操作废弃物次氯酸（2%-5%）+70%乙醇擦拭污染的工作区表面次氯酸（2%-5%）过夜浸泡使用过的PCR管存放架等以备下次使用耗材从仓库直接运送到PCR操作间，不经过不必要的实验室UV照射：表面、液体等，由于UV对500bp以下的DNA损害很小，所以可以处理已加入引物的反应液。内切酶和DNaseI可以对未加入模板和Taq酶的PCR反应液进行处理，处理完后加热灭活这些酶，然后进行PCR反应。尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)。第34页,共69页，2024年2月25日，星期天SFTSV细胞培养分离与鉴定1目的用于患者、宿主动物及媒介生物标本中发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）细胞培养分离与鉴定。2适用范围适用于SFTS患者、宿主动物及媒介生物样本的检测。第35页,共69页，2024年2月25日，星期天3.样品接收和准备3.1核对被检患者的姓名、性别、年龄、编号及检测项目；核对被检样本的来源、种类、编号、检测项目等。3.2用于检测的待测样品不能及时检测的储存在-70℃。4.实验原理标本中病毒通过在敏感组织细胞中培养放大，有利于病毒的进一步分析与鉴定，可以用来分离SFTSV的敏感细胞包括：Vero,Vero-E6等。第36页,共69页，2024年2月25日，星期天第37页,共69页，2024年2月25日，星期天SFTS血清学检测方法1.捕获法Mac-ELISA2.间接法ELISA3.双抗原夹心法ELISA4.双抗体夹心法ELISA5.空斑减少中和试验第38页,共69页，2024年2月25日，星期天IgM捕捉法ELISA检测SFTSV的IgM抗体1目的检测SFTSVIgM抗体。2适用范围适用于患者血清或血浆中SFTSVIgM抗体的快速检测。3.样品接收和准备3.1核对被检样品（血清或血浆）。3.2人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本试验。样品中无微生物，可在2-8℃储存一周，超过此期限建议-20℃以下冻存，避免反复冻融，使用前将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。第39页,共69页，2024年2月25日，星期天间接法ELISA-IgG抗体1目的：检测新布尼亚病毒IgG抗体。2适用范围：适用于血清或血浆中抗新布尼亚病毒IgG抗体的快速检测。3.样品接收和准备3.1核对被检样品（血