免疫检测技术（研）.ppt

免疫学检测 细胞 抗原抗体 细胞因子 二、影响因素 电解质 温度 酸碱度 Widal Agglutination ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ 类风湿因子(RF)乳胶凝集试验 三、免疫标记技术 1、免疫酶测定法 2、免疫荧光技术 3、放射免疫测定法 4、化学发光免疫技术 5、免疫胶体金技术 6、免疫印迹技术 ELISA 5、免疫胶体金技术（ICS） 氯金酸（HAuCl4） (1)、在免疫组化中的应用 (2)、胶体金在免疫层析快速诊断技术中的应用—近年来广泛使用（硝酸纤维膜） 以上几种标记法均可用 BAS-ELISA 亲合素（avidin）生物素（biotin）标记系统进行放大，增加反应的灵敏度 四、蛋白质芯片技术 二、免疫细胞功能的测定 （一）T淋巴细胞增殖试验 1. 原理： 2. 淋巴细胞转化的刺激物 非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原 3. 检测方法 （1）形态学检查法 方法学评价： 优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。 缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。 （2）3H-TdR掺入法 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。 (二) T细胞分泌功能测定 体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。 （三）T细胞介导的细胞毒试验 1.原理： 2.方法 形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞 肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线 (四) 体内试验 特异性抗原皮肤试验 （DTH） 二、B细胞功能检测 B细胞增殖能力的试验 溶血空斑试验 B细胞抗体形成功能的检测 体内试验 (一)B细胞增殖能力的试验 抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA (二) 溶血空斑试验 1. 原理： 2. 方法学： 经典溶血空斑形成试验 被动溶血空斑试验 3．临床应用与评价 溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响 评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。 (三)　 B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法 1.原理： 2．应用与方法学评价： 该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。 优点： 稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。 (四)　体内试验 体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。 （三）、细胞毒实验 1、51Cr释放法 cr 2、乳酸脱氢酶释放法 3、细胞染色法 4、凋亡细胞检测法凋亡 （四）、吞噬细胞功能测定 1、 趋化功能测定 （五）、细胞因子的检测 1、生物活性检测法 2、免疫学检测法（ELISA） 第四节 免疫学检测方法的应用 一、免疫学检测方法的评估与选择 1、监测感染性疾病:乙肝、AIDS等 2、监测肿瘤 3、监测移植排斥反应等 流式细胞仪分选 第三节 免疫细胞功能的检测 一、淋巴细胞的分离与类型鉴定 密度梯度离心法→PBMC（Ficoll） 尼龙毛柱法 E花环 免疫荧光法鉴定 磁珠分离 淘选法 流式细胞术 抗原肽－MHC分子四聚体技术 淋巴细胞 DNA合成 分化 母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松 无 有或无 有或无 伪足 无 有或无 有或无 浆内空泡 极少、天青色 增多、嗜碱 增多、嗜碱 胞质、着色 无 无 有或无 有丝分裂 无 有或无 清晰、1～4个 核仁 不增大、密集 增大、疏松 增大、疏松 核大小、染色质 6～8 12～