人血栓调节蛋白基因转染兔内皮祖细胞的体外实验研究的开题报告.docx

人血栓调节蛋白基因转染兔内皮祖细胞的体外实验研究的开题报告

一、研究背景

人血栓调节蛋白(Humanthrombomodulin,hTM)是一种细胞表面蛋白，在凝血和溶解过程中起到关键作用。其主要作用是与凝血酶进行结合，使凝血酶丧失活性，从而抑制血栓的形成，同时促进纤溶酶生成，加速血栓的溶解。因此，血栓调节蛋白在维护血管内稳态和防止血管病变中具有重要作用。

目前，利用基因转染技术向靶细胞导入血栓调节蛋白基因是治疗血管病变的一种潜在方法，但在纺锤体（thespindle）皮质细胞转录表达较低，大隐窝细胞不能够直接分泌到血管内腔，且雄性制剂产生的血管内皮细胞能够自然地产生血管性制剂。因此，本研究选用兔内皮祖细胞进行hTM基因的转染和表达，并进一步研究其对血管内生物反应的影响。

二、研究目的

本研究旨在通过体外实验，探究hTM基因对兔内皮祖细胞的转染效果及其对血管内生物反应的影响，为治疗血管病变提供理论依据和实验基础。

三、研究方法

1.兔内皮祖细胞的培养及鉴定：从新西兰白兔臀动脉取出内外膜，分离内皮细胞，经胰酶和胆汁酸的处理后得到内皮祖细胞，并鉴定其石蜡片免疫荧光染色和细胞标记技术。

2.hTM基因的构建：采用PCR扩增人hTM基因，并克隆到慢病毒载体上，经测序鉴定后得到重组慢病毒载体。

3.兔内皮祖细胞的基因转染：将已构建的重组慢病毒载体感染兔内皮祖细胞，通过表型观察和荧光显微镜观察表达hTM基因的内皮细胞。

4.hTM基因转染兔内皮祖细胞对血管内生物反应的影响：利用基因表达芯片技术和实时荧光定量PCR技术，分析hTM基因转染对兔内皮祖细胞基因表达的影响。

四、研究意义

本研究将探究血栓调节蛋白基因在兔内皮祖细胞转染中的效果，并评估其对血管内生物反应的影响，为深入研究血管病变的防治提供实验基础。同时，该研究也将为转基因技术的发展提供新思路和新方法。