大肠菌群检验课件.pptx

大腸菌群是指一群在37℃培養24小時能分解乳糖產酸產氣、需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。作為糞便污染指標，有廣泛的衛生學意義。

1、檢樣稀釋MPN：表示食品中大腸菌群數是以每100mL或克檢樣內大腸菌群最近似值，一般採用9管法。一般樣品25mL（克）+225mL生理鹽水=1：10，從此10-1取樣10mL，則其中含樣品為1mL（克）。接種到3管雙料乳糖發酵管中。從此10-1取樣1mL，則其中含樣品為0.1mL（克）。接種到3管單料乳糖發酵管中。表142—143。從10-1取樣1mL+9mL生理鹽水=1：100，從10-2取樣1mL，則其中含樣品為0.01mL（克）。接種到3管單料乳糖發酵管中。

2、乳糖發酵試驗（1）培養基單料乳糖膽鹽發酵管：蛋白腖2%豬膽鹽（或牛膽鹽）0.5%乳糖1%、1.6%溴甲酚紫酒精液0.06mlpH7.4。制法：將蛋白腖、膽鹽及乳糖溶於水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10mL，並放入一個小倒管，115℃高壓滅菌15min。雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外其他成分加倍。

（2）原理溴甲酚紫，中性時呈藍紫色，酸性時呈黃色，如果顏色不變（呈藍紫色），說明無產酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說明可能出現能分解乳糖產酸的大腸菌群。膽鹽可以抑制其他細菌生長繁殖。分解乳糖產酸產氣的大腸菌群，看小倒管中的氣體。

杜氏發酵管產氣情況1產氣2不產氣

鑒別培養基名稱加入化學物質微生物代謝產物培養基特徵性變化主要用途H2S試驗培養基糖發酵培養基伊紅美藍培養基醋酸鉛溴甲酚紫伊紅、美藍H2S乳酸、醋酸、丙酸等酸產生黑色沉澱由紫色變成黃色帶金屬光澤深紫色菌落鑒別產H2S菌株鑒別腸道細菌鑒別大腸菌群3、伊紅美藍瓊脂分離培養

4、證實試驗（1）革蘭氏染色：陰性、短桿菌（2）乳糖復發酵：產酸產氣

糞大腸菌群的檢驗檢驗的稀釋乳糖發酵試驗證實證驗（EC肉湯發酵伊紅美藍培養基）結果評定

EC肉湯發酵EC肉湯

胰蛋白或胰酪20.0g，3號膽鹽或混合膽鹽1.5g，乳糖5.0g，磷酸氫二鉀(K2HPO4)4.0g；磷酸二氫鉀(KH2PO4)1.5g，氯化鈉5.0g，蒸餾水1000.0mL將以上成分溶解於蒸餾水中,分裝16mm×150mm試管(管內有倒立的小發酵管),每管8mL。121℃高壓滅菌15min,最終pH6.9±0.1。

第一個半天器材準備4人/小組，每組準備器材並滅菌，如下：1、250mL三角瓶1個2、18×180mm試管2支3、乳糖發酵管（帶黑帽或棉塞，有刻度試管，內帶小倒管）15支4、250mL量筒1支5、1mL移液管2支6、10mL移液管2支7、平皿6套

第二個半天樣品處理及初發酵1、樣品處理2、檢樣稀釋與乳糖膽鹽發酵試驗3、培養18—26小時，於35—37攝氏度

第二天伊紅美藍培養基分離培養[接種EC肉湯（糞大腸菌群）1、伊紅美藍培養基分離培養2、接種EC肉湯（糞大腸菌群）

第三天證實試驗1、乳糖復發酵試驗2、EMB典型菌落革蘭氏染色鏡檢3、從陽性EC肉湯接種EMB分離培養。

第四天觀察結果與器材消毒與清洗1、觀察乳糖發酵管結果2、觀察EMB培養結果並革蘭氏染色鏡檢3、器材消毒與清洗4、查表報告結果與撰寫實驗報告