大肠菌群的检测.ppt

大肠菌群的检测讲解人：冷静标准名称：食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数国标号：GB4789.3-2010大肠菌群的定义在一定条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。大肠菌群的定义大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是一组与粪便污染有关的细菌。这群细菌括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌。?生化特征及血清学反应并非完全一致。分布：–广泛分布于自然环境。–来源人和温血动物的粪便。卫生学意义：–大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。–大肠菌群计数的高低，直接反映了样品受粪便污染的程度。–表示对人体健康是否具有潜在的危险性。样品检测采用方法：GB4789.2-2010第二法平板计数法奶粉成品(1/2/3段)、奶粉原材料、米粉成品、米粉原材料、葡萄糖原材料GB4789.3-2010第一法MPN法葡萄糖成品检测步骤及培养基2003版MPN法：初发酵乳糖胆盐发酵培养基↓分离培养伊红美兰培养基（EMB）↓染色、复发酵乳糖发酵管↓报告2003版第一法大肠菌群在EMB平板上的菌落形态紫黑色金属光泽。紫黑色无金属泽。中心紫黑色边缘粉红色。gb04789.03-2003.pdf2010版第一法两种培养基的比较初发酵培养基不同原方法：乳糖胆盐肉汤现方法：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤LST肉汤是国际上通用的培养基。与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性，LST中的选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，相对于胆盐稳定性更好些。还有就是LST更容易观察。结果报告单位不同原方法：MPN/100g(mL)现方法：MPN/g(mL)两种培养基的比较煌绿乳糖胆盐培养基煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。胆盐可抑制革兰氏阳性菌。复发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。复发酵（煌绿乳糖胆盐培养基）2010版第二法平板计数法适用范围与培养基平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更精确。适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是MPN法更有势。所用培养基：VRBA琼脂、BGLB培养基。平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA的主要成分：乳糖、胆盐、结晶紫、中性红及细菌生长所必需的营养成分如：蛋白胨、酵母膏等。结晶紫和中性红为VRBA的指示剂系统，在酸性条件下为紫红色。大肠菌群分解乳糖所产生的酸与胆盐结合，可形成沉淀。大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×10-4/g(mL)＝6.0×105CFU/g(mL)