改良Harris苏木素染色液操作步骤及注意事项.pdf

改良Harris苏木素染色液操作步骤及注意事项 货号: G1150 规格:100ml/500ml 产品说明： 苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺 旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易 与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色， 所以细胞核被染成蓝色。 操作步骤 （仅供参考）： （一） 石蜡切片染色 1、 切片脱蜡至水 ① 二甲苯作用2次，每次5～10min。 ② （可选）无水乙醇作用2次，每次3～5min。 ③ 95%的乙醇 3～5min ④ 90%的乙醇 3～5min ⑤ 80%的乙醇 3～5min ⑥ 自来水或蒸馏水冲洗 1～3min 2、染色 ①改良Harris苏木素染色液 5～8min ②自来水或蒸馏水冲洗 5～10s ③ （可选）1%盐酸乙醇分化 2～5s ④自来水冲洗 20～30s ⑤ （可选）弱碱性水返蓝 20～40s ⑥自来水冲洗 30～60s ⑦伊红染色 3～5min ⑧自来水冲洗 1～5s 3、脱水、透明、封固 ①80%乙醇 10～20s ②90%乙醇 10～20s ③95%乙醇作用2次，每次1～2min。 ④无水乙醇作用2次，每次2～3min。 ⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。 ⑥中性树脂封片。 染色结果： 细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红 细胞等呈明亮的橙红色。 （二） 冰冻切片染色 1、乙醚-乙醇混合固定液 5～10s 2、自来水冲洗 2～5s 3、改良苏木素染色液滴染 1～2min(可加热至50℃)。 4、自来水冲洗 2～5s 5、（可选）1%的盐酸乙醇分化液 2～5s 6、自来水冲洗 2～5s 7、 （可选）弱碱性水返蓝 2～5s 8、自来水冲洗 5～10s 9、伊红染色液染色 2～5s 10、水洗 1～2s 11、80%的乙醇 1～2s 12 、95%的乙醇 1～2s 13、无水乙醇 2～5s 14、苯酚二甲苯 （1:3） 2～5s 15、二甲苯透明3次，每次2～5s。 16、中性树脂封片 染色结果： 细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。 （三） 细胞染色 1、 4%的多聚甲醛固定 10～20min。 2、 自来水冲洗2次， 每次2min。 3、 蒸馏水冲洗2次， 每次2min。 4、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。 染色结果： 细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。 注意事项： 1、 切片脱蜡应尽量干净。 2、 乙醇应经常更换新液。 3、 盐酸乙醇分化液的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和盐酸乙醇分化液 的新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。 4、 乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸， 密闭保存。 5、 冷冻切片染色时间尽量要短。 6、 促蓝液常使用0.2～1%氨水水溶液或Scoot促蓝液或0.1