实验1-大肠杆菌的培养与分离.ppt

一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。大肠杆菌的划线分离注意事项:接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。划线首尾不能相接。划线后，培养皿倒置培养12~24h。划线分离法为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。生物技术也叫生物工程,是应用自然科学及工程学的原理,以微生物、动物、植物作为反应器,将物料进行加工,以提供产品为社会服务的技术。例如：以酵母为反应器制酒、以醋杆菌为反应器制醋、以转基因的大肠杆菌为反应器生产生长激素、以羊为反应器生产人乳。生物技术概述生物工程发展史传统生物技术如酿酒、制作酸奶、污水处理、垃圾处理2、现代生物技术利用大肠杆菌生产胰岛素、生长激素、促红细胞生成素等药品。01细胞工程、02发酵工程、03酶工程、04蛋白质工程、05基因工程现代生物工程包括:基因工程：剔除或改变有害基因，引入正确基因或有利基因。第一部分:微生物的应用特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物原生生物真菌一、基础知识：

(一)微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．(二)细菌的常识结构1分裂2生殖3在基因工程中的应用4大肠杆菌细菌的外形与大小大肠杆菌属于杆状菌图1-1常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.螺旋菌大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌光能自养型:光合细菌化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。自养菌:异养菌:12细菌的营养类型菌落单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落的形态是鉴定菌种的重要依据。革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。大肠杆菌属于革兰氏阴性菌细菌的革兰氏染色☆培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.培养基的类型(三)细菌的培养成分区别：有无琼脂液体培养基：扩增细菌（培养），工业生产固体培养基：纯化（分离），鉴定、保藏菌种2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方3.不管哪种培养基，基本成分都是相同的。一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、氧气、渗透压的要求．细菌喜荤，霉菌喜素大肠杆菌培养基LB培养基配方：酵母提取物???0.25g蛋白胨???0.5gNacl?????0.5g琼脂????1g水:50ml无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。是成功地培养微生物的关键。0102无菌技术1.无菌技术的概念消毒定义：消毒与灭菌的概念及两者的区别灭菌的定义：是指杀灭病原微生物的方法。如乙醇消毒是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法。灼烧灭菌灭菌的方法：常用的消毒与灭菌的方法高压蒸汽灭菌锅干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。高压蒸气灭