细胞壁代谢指标测定.pdf

1粗纤维的测定（GB/T5009.102003）

1.原理在硫酸作用下，水解除去果蔬中的糖、淀粉、果胶物质和一些半纤维素，再

用碱处理出去样品中的蛋白质及脂肪酸，遗留的残渣即为粗纤维。

2.仪器及用具三角瓶、古氏坩埚、亚麻布

3.试剂

1）1.25%硫酸，12.5g/L氢氧化钾溶液，酚酞指示剂

2）甲基红指示剂称取0.1g甲基红溶于100ml60%乙醇中。

3）石棉加50g/L氢氧化钠溶液浸泡石棉，在水浴上回流8h以上，再用热水充分洗涤。然后用20%

C

盐酸在沸水浴上回流8h,再用热水充分洗涤，干燥。在600-700下灼烧后，加水使成混悬物，贮存

于带塞玻璃瓶中。

4.实验步骤

1）样品酸处理称取10.0g样品，加入少量1.25%硫酸溶液研磨成匀浆后转入500ml三角瓶中，加

入0.5g石棉和200ml煮沸的1.25%硫酸，加热使微沸，并立即链接回流冷凝管以保持体积恒定，维

持30min，每隔5min将锥形瓶轻轻振荡一次，以充分混合瓶内的物质，避免样品附着在液面以上的

瓶壁上。加热完毕后，立即用亚麻布过滤，用沸水洗涤残渣至洗液不呈酸性（以甲基红为指示

剂）。

2）样品碱处理用200ml煮沸的12.5g/L氢氧化钾溶液，将亚麻布上的残留物洗入原三角瓶内，接

上回流冷凝管，加热微沸30min后，取下三角瓶，立即用亚麻布过滤，以沸水洗涤2-3次至洗液不呈碱

性（以酚酞为指示剂）。

3）干燥用水把亚麻布上的残留物洗入100ml烧杯中，然后移入以称重干燥的古氏坩埚中，抽滤，并

用热水充分洗涤后，抽干。在依次用乙醇和乙醚各洗涤一次，以出去单宁、色素及

C

残余的脂肪等物质。将坩埚和内容物在105烘箱中烘干后称量，重复操作，直至恒重（两

次称量质量1mg）。

5.结果计算粗纤维含量以质量分数（%）表示。

粗纤维含量=G/m*100%

G—残余物的质量，；m—样品质量，g。

注：用亚麻布过滤时，最好采用200目尼龙筛绢过滤，既耐较高温度，孔径又稳定，本身不

吸水分，洗残渣也较容易。过滤时间不能太长，一般不能超过10min，否则应适量减少称样

量。

2纤维素酶活性的测定（C）参照曹建康的方法

基本原理：在纤维素酶作用下，纤维素可被逐步水解并最终生成B-葡萄糖。在碱性条件下，

纤维素酶催化纤维素水解的产物纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将3,5—二硝基水杨酸（DNS）

还原。通过测定纤维素酶催化形成还原糖的量可测定纤维素酶的活性。

材料、仪器及试剂：

1.仪器及用具：恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、试管、移液管或加液器、具塞刻度试

（

管（25mL）、容量瓶100mL、1000mL）、烧杯等。

2.试剂：

（1）50mmol/L、pH5.5乙酸—乙酸钠缓冲液配制方法

母液A（0.2mol/L乙酸溶液）:量取11.55mL冰醋酸，加蒸馏水稀释至1000mL。

）（）

母液B（0.2mol/L乙酸钠溶液：称取16.4g无水乙酸钠或称取27.2g三水合乙酸钠，用蒸馏水

溶解，稀释至1000mL。

取6.8mL母液A和43.2mL母液B混合后，稀释至200mL，即为50mmol/L、pH5.5乙酸一乙酸钠缓

冲液。

（

⑵提取缓冲液含1.8mol/LNaCI）:称取10.5gNaCI,用50mmol/L、pH5.5乙酸一乙酸钠缓冲液溶解，

稀释至100mL，摇匀。

（3）50mmol/L、pH5.0柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液

母液A（0.2mol/L柠檬酸溶液）：称取42.03gCHOHO，溶解稀释至lOOOmL。