VEGFA基因重组真核表达载体的构建与表达吴勇 .pdf

安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2013Jan;17(1)·45·

VEGFA基因重组真核表达载体的构建与表达

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吴勇刘学刚郭嘉诚李慧敏丁周志王亚明宋伟徐家丽赵武

(1．;2．;3．，233004)

蚌埠医学院第一附属医院儿科心胸外科超声心动图安徽蚌埠

：VEGFApEGFP-VEGFA，（HEK293T）。

摘要目的构建基因重组真核表达载体并检测其在人胚胎肾细胞中的表达方法以人

RNA，RT-PCRVEGFA，pEGFP-Nl，

脐血单核细胞的为模板采用技术扩增基因并将其定向插入真核表达载体中构建重组真核

pEGFP-VEGFA。BglIISalIDNA，pEGFP-VEGFA

表达载体经限制性核酸内切酶和酶切和测序鉴定后用脂质体法将转染

HEK293T，24h48hpEGFP-VEGFA。pEGFP-VEGFA4697bp

细胞转染后和采用荧光显微镜观察的表达结果被双酶切为

1251bp，VEGFAGenBankVEGFAmRNA。HEK293T

和两条条带测序结果证实序列与公布的序列完全一致在经转染的细胞

，pEGFP-VEGFAHEK293T，。

内观察到较强的绿色荧光表明成功转染细胞并在其中得到了表达结论成功构建重组真核表

pEGFP-VEGFA，VEGFA。

达载体为进一步研究基因的生物学功能奠定了基础

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