Pin1基因真核表达载体的构建及在宫颈癌HeLa细胞中的表达.pdf

( ) 第 36 卷第 5 期第 633 页 华中科技大学学报 医学版 Vol . 36 　No . 5 　P . 633 2007 年 10 月 　　　　Act a Med U niv Sci Technol Huazhong 　　　　 Oct . 　2007 Pin 1 基因真核表达载体的构建及在 宫颈癌 HeL a 细胞中的表达 1 ,2 1 1 1 1 李红雨 　　朱 　涛 　　周金华 　　徐 　茜 　　胡春霞 1 1 1 1 △ 邓东锐 　　王世宣 　　卢运萍 　　马 　丁 1 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科 ,武汉 　430030 2 郑州大学第三附属医院妇产科 ,郑州 　450052 摘要 　目的　构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶 Pin 1 的质粒 , 以绿色荧光蛋白作为报告基因 ,观察其在宫颈癌 ( ) HeL a 细胞中的表达 。方法 　从人宫颈癌 HeL a 细胞中 , 以 R TPCR 方法扩增出人 Pin 1 基因全长 cDN A 序列 CD S ,插 入增强绿色荧光蛋白表达质粒 p E GFPC1 ,脂质体法转染 HeL a 细胞 ,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达 ,免疫印 迹法检测 GFPPin 1 蛋白的表达 。结果 　R TPCR 扩增出人 Pin 1 基因;构建p E GF PC1Pin 1 重组质粒 ,体外成功转染入 宫颈癌 HeL a 细胞 ,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达 ,免疫印迹法证实存在 GFPPin 1 蛋白高表达 ;经 G4 18 筛选获得单细胞克隆 。结论 　重组质粒 p E GFPPin 1 体外转染 HeL a 细胞后 , 目的基因能够在细胞内有效表达 ,检测方 法简便可靠 ,为利用转染该 目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础 。 关键词 　肽基脯氨酰顺反异构酶 Pin 1 ; 　质粒构建 ; 　基因转染 中图法分类号 　R737 . 33 Construction of pEGFPPin1 Recombinant Plasmid and Its Expression in Cervical Cancer Cell L ine Li Hongyu1 , 2 , Zhu Tao1 , Zhou J inhua1 et al 1 D ep a rtment of Obs tet rics an d Gy necology , Tongj i H osp i t al , Tongj i M e d ical Col leg e , 　　H uaz hong Uni ve rs i ty of